Rakkude arvu määramine tahkele toitekeskkonnale külvamise teel (Kochi plaadi meetod). R. Kochi tööd ja nende tähendus mikrobioloogia ja nakkuspatoloogia jaoks Aeroobide mikrobioloogia puhaskultuuri eraldamine

Mikrobioloogia, viroloogia ja immunoloogia arengu peamised etapid

Nende hulka kuuluvad järgmised:

1.Empiirilised teadmised(enne mikroskoopide leiutamist ja nende kasutamist mikromaailma uurimiseks).

J. Fracastoro (1546) pakkus välja nakkushaiguste tekitajate eluslooduse - contagium vivum.

2.Morfoloogiline periood kestis umbes kakssada aastat.

Antonie van Leeuwenhoek 1675. aastal esmakordselt kirjeldati algloomi, 1683. aastal - bakterite peamisi vorme. Instrumentide (mikroskoopide X300 maksimaalne suurendus) ja mikromaailma uurimismeetodite ebatäiuslikkus ei aidanud kaasa teaduslike teadmiste kiirele kogunemisele mikroorganismide kohta.

3.Füsioloogiline periood(alates 1875) - L. Pasteuri ja R. Kochi ajastu.

L. Pasteur - käärimis- ja lagunemisprotsesside mikrobioloogiliste aluste uurimine, tööstusliku mikrobioloogia arendamine, mikroorganismide rolli selgitamine ainete ringluses looduses, avastus anaeroobne mikroorganismid, põhimõtete väljatöötamine aseptikas, meetodid steriliseerimine, nõrgenemine ( sumbumine)virulentsus ja saamine vaktsiinid (vaktsiinitüved).

R. Koch - isoleerimismeetod puhtad kultuurid tahkel toitainekeskkonnal, meetodid bakterite värvimiseks aniliinvärvidega, siberi katku, koolera tekitajate avastamine ( Kochi koma), tuberkuloos (Kochi pulgad), mikroskoopia tehnoloogia täiustamine. Henle-kriteeriumide eksperimentaalne põhjendamine, mida tuntakse Henle-Kochi postulaatidena (triaad).

4.Immunoloogiline periood.

I. I. Mechnikov on Emil Roux kujundliku määratluse järgi "mikrobioloogia luuletaja". Ta lõi mikrobioloogias uue ajastu - immuunsuse (immuunsuse) doktriini, arendades fagotsütoosi teooriat ja põhjendades rakulist immuunsuse teooriat.

Samal ajal koguti andmeid organismis toimuva tootmise kohta antikehad bakterite ja nende vastu toksiinid, mis võimaldas P. Ehrlichil arendada immuunsuse humoraalset teooriat. Sellele järgnenud pikaajalises ja viljakas arutelus fagotsüütiliste ja humoraalsete teooriate pooldajate vahel paljastati palju immuunsuse mehhanisme ja teadus sündis. immunoloogia.

Hiljem selgus, et pärilik ja omandatud immuunsus sõltub viie põhisüsteemi koordineeritud tegevusest: makrofaagid, komplement, T- ja B-lümfotsüüdid, interferoonid, peamine histo-sobivussüsteem, mis pakuvad erinevaid immuunvastuse vorme. I. I. Mechnikov ja P. Erlich 1908. aastal. anti Nobeli preemia.

12. veebruar 1892 Venemaa Teaduste Akadeemia koosolekul teatas D.I Ivanovsky, et tubaka mosaiikhaiguse põhjustaja on filtreeritav viirus. Seda kuupäeva võib pidada sünnipäevaks viroloogia ja D.I Ivanovsky on selle asutaja. Seejärel selgus, et viirused põhjustavad haigusi mitte ainult taimedes, vaid ka inimestel, loomadel ja isegi bakteritel. Kuid alles pärast geeni olemuse ja geneetilise koodi kindlakstegemist liigitati viirused eluslooduseks.

5. Järgmine oluline etapp mikrobioloogia arengus oli antibiootikumide avastamine. 1929. aastal A. Fleming avastas penitsilliini ja algas antibiootikumravi ajastu, mis viis revolutsioonilise eduni meditsiinis. Hiljem selgus, et mikroobid kohanevad antibiootikumidega ja ravimiresistentsuse mehhanismide uurimine viis teise antibiootikumi avastamiseni. ekstrakromosomaalne (plasmiidne) genoom bakterid.

Õppimine plasmiidid näitas, et nad on veelgi lihtsamalt struktureeritud organismid kui viirused ja erinevalt bakteriofaagid ei kahjusta baktereid, vaid annavad neile täiendavaid bioloogilisi omadusi. Plasmiidide avastamine on oluliselt avardanud arusaama elu eksisteerimise vormidest ja võimalikest evolutsiooniteedest.

6. Kaasaegne molekulaargeneetiline staadium Mikrobioloogia, viroloogia ja immunoloogia areng algas 20. sajandi teisel poolel seoses geneetika ja molekulaarbioloogia saavutustega ning elektronmikroskoobi loomisega.

Bakteritega tehtud katsed on tõestanud DNA rolli pärilike tunnuste edasikandmisel. Bakterite, viiruste ja hiljem plasmiidide kasutamine molekulaarbioloogia ja geeniuuringute objektidena on viinud elu aluseks olevate põhiprotsesside sügavamale mõistmiseni. Bakteri DNA-s geneetilise informatsiooni kodeerimise põhimõtete selgitamine ja geneetilise koodi universaalsuse kindlakstegemine võimaldas paremini mõista kõrgemalt organiseeritud organismidele omaseid molekulaargeneetilisi mustreid.

Escherichia coli genoomi dekodeerimine on võimaldanud geenide kavandamist ja siirdamist. Nüüdseks Geenitehnoloogia loonud uusi suundi biotehnoloogia.

Paljude viiruste molekulaargeneetiline korraldus ja rakkudega interaktsiooni mehhanismid on dešifreeritud, viiruse DNA võime integreeruda tundliku raku genoomi ja viiruse kantserogeneesi põhimehhanismid.

Immunoloogia on läbi teinud tõelise revolutsiooni, väljudes kaugelt nakkusliku immunoloogia piirest ja kujunedes üheks olulisemaks meditsiinilise ja bioloogilise põhiteaduse valdkonnaks. Praeguseks on immunoloogia teadus, mis uurib mitte ainult kaitset nakkuste eest. Tänapäeva mõistes Immunoloogia on teadus, mis uurib organismi enesekaitse mehhanisme kõige geneetiliselt võõra eest, säilitades organismi struktuurse ja funktsionaalse terviklikkuse.

Immunoloogia hõlmab praegu mitmeid spetsialiseeritud valdkondi, millest koos nakkusliku immunoloogiaga on olulisemad immunogeneetika, immunomorfoloogia, transplantatsiooni immunoloogia, immunopatoloogia, immunohematoloogia, onkoimmunoloogia, ontogeneesi immunoloogia, vaktsinoloogia ja rakendatud immunodiagnostika.

Mikrobioloogia ja viroloogia kui bioloogia põhiteadused hõlmab ka mitmeid sõltumatuid teadusharusid, millel on oma eesmärgid ja eesmärgid: üldine, tehniline (tööstuslik), põllumajandus, veterinaaria ja kõrgeim väärtus inimkonna jaoks meditsiiniline mikrobioloogia ja viroloogia.

Meditsiiniline mikrobioloogia ja viroloogia uurib inimese nakkushaiguste tekitajaid (nende morfoloogiat, füsioloogiat, ökoloogiat, bioloogilisi ja geneetilisi omadusi), töötab välja nende kasvatamise ja tuvastamise meetodeid, spetsiifilisi meetodeid nende diagnoosimiseks, raviks ja ennetamiseks.

Bakterite koguarvu määramiseks kasutatakse Kochi meetodit. Tühja steriilsesse Petri tassi valatakse 1 ml sobivast lahjendusest uuritavat ainet ja valatakse 10 - 15 ml sulatatud ja temperatuurini 45 0 C jahutatud MPA-d, mis segatakse vedelikuga, pöörates tassi laua pinnal.

Pärast põllukultuuride kasvatamist loendatakse agari pinnal ja sügavuses kasvanud kolooniad. Selleks asetatakse tass tagurpidi mustale taustale, iga loendatud koloonia märgitakse klaasile markeriga. Hinnati ainult neid plaate, millel kasvas 30 kuni 300 kolooniat. Kui plaadil on kasvanud üle 300 koloonia ja analüüsi ei saa korrata, saab kolooniaid loendada tugeva külgvalgustuse all luubi ja spetsiaalse ruudustikuga plaadi abil.

Kolooniate arv loendatakse vähemalt 20 ruudus, mille pindala on 1 cm 2 plaadi erinevates kohtades. Arvutatakse keskmine kolooniate arv 1 cm2 kohta ja korrutatakse tassi pindalaga.

Kolooniate loendamisel saab kasutada spetsiaalset bakteriloendusseadet PSB.

Iga tassi kolooniate loendamise tulemuseks on bakterite arv 1 ml (cm 3) või 1 g uuritava materjali kohta, võttes arvesse lahjendamist. Bakterite lõplik arv võetakse kahe kõrvuti asetseva lahjendusega nakatatud plaatide kolooniate loendamise tulemuste aritmeetilise keskmisena.

Näide: lahjendus 10 -1 - 250 kolooniat, lahjendus 10 -2 - 23 kolooniat.

Bakterite üldarv = 250 x 10 + 23 x 100 / 2 = 2400 cfu/ml = 2,4 x 102 cfu/ml (kolooniaid moodustavaid ühikuid ml kohta).

Uurimistulemust saab ümardada 2–3 märgilise numbrini.

Tiitrimismeetod.

Kasutatakse SPM-i arvu määramiseks.

1. etapp: materjali homogeniseerimine. Vajadusel valmistada suspensioon mikroorganismide ülekandmiseks vedelasse faasi.

2. etapp: lahjenduste seeria valmistamine.

3. etapp: külvatakse valitud kogused uuritavat materjali (100, 10, 1 ml) ja selle 1 ml lahjendusi vedelasse toitekeskkonda. Meetodi täpsuse suurendamiseks võib iga ruumala nakatada paralleelselt mitmesse toitekeskkonna portsjonisse (kahe-, kolme-, viierealine külv). Optimaalne on kolmekordne kordus (piisav töökindlus suhteliselt madalate kuludega).

4. etapp: võttes arvesse kasvu olemasolu vedelal toitekeskkonnal ja külvamist positiivsetest kogustest tahkele toitekeskkonnale.

5. etapp: tahkel toitainekeskkonnas kasvatatud mikroorganismide tuvastamine. Sel juhul võetakse arvesse kultuurilisi omadusi ja vajadusel tehakse täiendavaid uuringuid (tintoriaalsete, morfoloogiliste, biokeemiliste ja seroloogiliste omaduste uuring).

Kui kasutatakse üherealist meetodit, väljendatakse tulemust reeglina soovitud mikroorganismi tiitrina, mis on väikseim maht (kõrgeim lahjendus), milles see veel tuvastati.

Kui kasutati mitmerealist meetodit, salvestatakse tulemused spetsiaalsete tabelite abil, mis võimaldavad kasvu andnud positiivsete mahtude kombinatsiooni põhjal määrata tiitri või indeksi (TNI).

Erilised keskkonnad.

Bakterioloogias kuiv toitainekeskkond tööstustoodang, mis on hügroskoopsed pulbrid, mis sisaldavad kõiki söötme komponente peale vee. Nende valmistamiseks kasutatakse odavate toiduks mittekasutatavate toodete (kalajäätmed, liha- ja kondijahu, tehniline kaseiin) trüptilisi seedimisi. Neid on mugav transportida, neid saab pikka aega säilitada, need vabastavad laborid tohutust kandja ettevalmistamise protsessist ja toovad meid lähemale meedia standardimise küsimuse lahendamisele. Meditsiinitööstus toodab kuivsöötmeid Endo, Levin, Ploskirev, vismutsulfitagarit, toitaineagarit, BP indikaatoriga süsivesikuid jt.

Termostaadid

Mikroorganismide kasvatamiseks kasutatakse termostaate.

Termostaat on seade, mis hoiab püsivat temperatuuri. Seade koosneb küttekehast, kambrist, topeltseintest, mille vahel ringleb õhk või vesi. Temperatuuri reguleerib termostaat. Enamiku mikroorganismide paljunemiseks on optimaalne temperatuur 37°C.

7. TUND

TEEMA: AEROBIDE PUHTKULTUURI ERALDAMISE MEETODID. AEROOBSETE BAKTERITE PUHTKULTUURI MEHHAANILISE DISSOTSIOONIMISE MEETODIL ERALDATAMISE SAMMID

Tunniplaan

1. Bakterite “puhaskultuuri” mõiste

2. Meetodid puhaste kultuuride isoleerimiseks mehaanilise eraldamise teel

3. Bioloogilised meetodid puhaskultuuride eraldamiseks

4. Bakterite tuvastamise meetodid

Tunni eesmärk: Tutvustada õpilasi erinevate puhaskultuuride eraldamise meetoditega, õpetada külvamist silmuse, löökide ja süstiga.

Juhised demonstratsiooniks

Nende looduslikus elupaigas leidub baktereid kooslustena. Mikroobide omaduste ja rolli määramiseks patoloogilise protsessi arengus on vajalik, et bakterid oleksid homogeensete populatsioonide (puhaskultuuride) kujul. Puhaskultuur on toitekeskkonnas kasvatatud sama liigi bakteri isendite kogum.

Meetodid aeroobsete bakterite puhaskultuuride eraldamiseks

Pasteuri meetod Kochi meetod Bioloogiline füüsikaline

(on ajalooline (plaadi juhtmestik)

Tähendus)

Keemiline meetod

Štšukevitš

Kaasaegne

Aasaga külv Külv spaatliga

(Drigalski meetod)

Meetodid puhaste kultuuride eraldamiseks:

1. Mehaanilised eraldamismeetodid põhinevad mikroobide eraldamisel uuritava materjali järjestikuse hõõrumisega agari pinnale.

a) Pasteuri meetod – on ajaloolise tähtsusega, näeb ette uuritava materjali järjestikuse lahjendamise vedelas toitekeskkonnas rullimismeetodi abil

b) Kochi meetod – plaadimeetod – põhineb uuritava materjali järjestikusel lahjendamisel lihapeptoonagariga, millele järgneb lahjendatud materjaliga katseklaaside valamine Petri tassidesse.

c) Drigalsky meetod - mikroflooraga rikkalikult külvatud materjali külvamisel kasutage spaatliga järjestikuseks külviks 2-3 tassi.

d) Külv aasaga paralleelsete tõmmetega.

2. Bioloogilised meetodid põhinevad bioloogilised omadused patogeenid.

a) Bioloogiline - ülitundlike loomade nakatumine, kus mikroobid kiiresti paljunevad ja kogunevad. Mõnel juhul on see meetod ainuke, mis võimaldab isoleerida haigelt inimeselt patogeeni kultuuri (näiteks tulareemiaga), mõnel juhul on see tundlikum (näiteks pneumokoki isoleerimine valgetel hiirtel või patogeeni patogeenis). tuberkuloos merisigadel).

b) Keemiline – põhineb mükobakterite happekindlusel. Materjali vabastamiseks kaasnevast taimestikust, see
töödeldud happelahusega. Kasvavad ainult tuberkuloosibatsillid, kuna happeresistentsed mikroobid surid happe mõjul.

c) Füüsikaline meetod põhineb eoste vastupidavusel kuumusele. Eoseid moodustavate bakterite kultuuri eraldamiseks
segusid, materjali kuumutatakse temperatuuril 80 °C ja inokuleeritakse toitainekeskkonnale. Kasvavad ainult eosbakterid, kuna nende eosed jäid ellu ja tekitasid kasvu.

d) Štšukevitši meetod - põhineb Proteus vulgarise suurel liikuvusel, mis on võimeline tekitama hiilivat kasvu.

Plaatagari valmistamise meetod

MPA sulatatakse veevannis, seejärel jahutatakse temperatuurini 50-55 °C. Pudeli kael põletatakse piirituslambi leegis, Petri tassid avatakse nii, et pudeli kael mahub sisse ilma tassi servi puudutamata, valatakse 10-15 ml MPA-d, kaas pannakse. suletuna raputatakse tassi nii, et sööde jaotuks ühtlaselt, ja jäetakse horisontaalsele pinnale, kuni see taheneb. Pärast kuivatamist hoitakse plaatagarplaate külmas.

Silmuskülv

Steriilse jahutatud aasa abil võtke tilk materjali, avage vasaku käega tassi üks serv, tooge aas sisse ja tehke paar tõmmet ühes kohas vastasservas oleva aasaga, seejärel rebige aas ära ja nakatage. materjali paralleelsete tõmmetega tassi ühest servast teise 5-6 mm vahega. Külvi alguses, kui silmusel on palju mikroobe, annavad nad kokkuvoolu, kuid iga tõmbega on silmusel järjest vähem mikroobe ning nad jäävad üksikuks ja tekitavad isoleeritud kolooniaid.

Külvamine Drigalsky meetodil

Seda meetodit kasutatakse tugevalt mikroflooraga (mäda, väljaheited, röga) saastunud materjali inokuleerimiseks. Drigalsky meetodil külvamiseks võtke spaatel ja mitu tassi (3-4). Spaatel on kolmnurga või L-kujuliseks painutatud metalltraadist või klaasnoolest valmistatud tööriist. Materjal sisestatakse silmuse või pipetiga esimesse tassi ja jaotatakse spaatliga ühtlaselt söötme pinnale ilma seda põletamata, materjal hõõrutakse teise tassi toitainekeskkonda ja seejärel; kolmandas. Sellise külvi korral kasvab esimene tass kokku ja järgmistes tassides kasvavad isoleeritud kolooniad.

Bakterite isoleerimiseks puhaskultuuridena on teada suhteliselt vähe meetodeid. Seda tehakse kõige sagedamini üksikute rakkude isoleerimisega tahkel söötmel, kasutades triibutamise meetodit või valades plaatidele väikese koguse vedelkultuuri ( piirav lahjendusmeetod). Eraldi koloonia saamine ei taga aga alati kultuuri puhtust, kuna kolooniad võivad kasvada mitte ainult üksikutest rakkudest, vaid ka nende klastritest. Kui mikroorganismid moodustavad lima, kinnituvad sellele sageli võõrvormid. Puhastamiseks on eelistatav kasutada mitteselektiivset söödet (NSM), kuna saastavad mikroorganismid kasvavad sellel paremini ja neid on lihtsam tuvastada.

Eraldatud kolooniate saamine tahkel toitesöötmel saavutatakse kas mikroorganismide suspensiooni sõelumisel spaatliga ( Kochi meetod) või kasutades bakterioloogilist silmust ( kurnatusinsuldi meetod). Mikroorganismirakkude mehaanilise eraldamise tulemusena võib igaüks neist tekitada ühte tüüpi mikroobide isoleeritud koloonia.

Sõelu spaatliga (Kochi meetod) toodetakse järgmises järjestuses:

1) tilk rikastuskultuuri kantakse steriilse pipetiga tassi nr 1 toitesöötme pinnale ja jaotatakse steriilse spaatliga;

2) võtke spaatel välja, sulgege kiiresti tass ja viige spaatel topsi nr 2 ilma seda steriliseerimata. Simuleerige kultuuri jaotumist kogu söötme pinnal, puudutades selle pinda spaatli sama küljega, mida varem kasutati proovi jaotamiseks;

3) täpselt samad toimingud tehakse tassis nr 3, mille järel spaatliga steriliseeritakse;

4) külvinõud asetatakse termostaati ja inkubeeritakse optimaalsel temperatuuril.

Teatud aja möödudes eemaldatakse tassid termostaadilt ja uuritakse mikroorganismide kasvu. Tavaliselt täheldatakse tassis nr 1 pidevat bakterite kasvu ja järgnevates tassides märgitakse kolooniaid.

Silmussõelumine (tühjendustriibu meetod) hõlmab bakterioloogilise ahela külvamist rikastuskultuurist agarsöötme pinnale Petri tassidel. Esimeses etapis tehakse agarisöötmele rida paralleelseid lööke, kasutades kultuuriga silmust (joonis 4.2, A). Silmus steriliseeritakse, jahutatakse agarisöötme inokuleerimata osal ja tehakse rida liigutusi esimeste liigutustega risti (joonis 4.2, B). Seejärel steriliseeritakse silmus uuesti, jahutatakse ja liigutatakse suunas IN(joonis 4.2) ja pärast järgmist steriliseerimist - suunas G(Joonis 4.2). Tassid asetatakse termostaadi ja tulemusi võetakse teatud aja möödudes arvesse. Tavaliselt löökide peal A Ja B kasvab üles suur number kolooniad (mõnikord pidev kasv), samas kui triibud IN Ja G moodustuvad isoleeritud kolooniad.

Joonis 4.2 – Bakterite ribade sõelumise skeem isoleeritud kolooniate saamiseks

Seerialahjendused tahkes söötmes- lihtsaim meetod plaatide külvamiseks, mis seisneb selles, et pärast proovi inokuleerimist katseklaasi steriilse sulatatud ja jahutatud agariga segatakse sööde, valatakse Petri tassi ja lastakse taheneda. Hästi isoleeritud kolooniate saamiseks valmistage järjestikused kümnekordsed lahjendused ja lisage 1 ml proove otse tassi, lisage 15–20 ml sula agarisöödet ja segage tassi loksutades. Mõnikord satuvad üksikud kolooniad agarisse ja neid saab eemaldada ainult mehaaniliselt. Halb on ka see, et bakterid viibivad mõnda aega sulaagari temperatuuril keskkonnas.

Kui taimedel esinevate teatud sümptomite ja mikroskoopilise uuringu tulemuste põhjal kahtlustatakse, et haiguse tekitajaks on bakter, tuleks järgmiseks sammuks see isoleerida.

Sel juhul eeldatakse, et patogeen on saastunud kaasnevate organismidega, st tegemist on segapopulatsiooniga. Patogeeni saamiseks eraldi kasvava kolooniana tuleks koe leotada söötmele triibud.

Külv puudutusega. Kasutades kaltsineeritud inokulatsioonisilmust, võtta väike kogus baktereid sisaldavat taimekoe leotust ja kergete liigutustega, agari pinda kahjustamata, teha ettevalmistatud toitekeskkonnale 4-6 tõmmet. Pärast silmuse uuesti kaltsineerimist pööratakse söötmega tassi 90° paremale ja seejärel tehakse alates teisest tõmbest veel 4-6 lööki, nõel kaltsineeritakse uuesti ja tehakse kolmas külv. Sellega saavutatakse lähteaine lahjendus nii, et bakterid moodustavad pärast 48–72-tunnist inkubeerimist termostaadis 28 °C juures üksikuid erineva kuju ja värviga kolooniaid. Seejärel viiakse kolooniad edasiseks uurimiseks agari kaldtorudesse. Kasutage kaltsineeritud silmust, võtke koloonia ja kandke see ettevaatliku liigutusega ussi või siksaki kujul toitaineagarile.

Kochi valamise meetod. Kochi plaadi meetod tagab, et iga koloonia moodustub ühest bakterirakust. Parim on valmistada lähteainest suspensioon steriilses vees ja kasutada Kochi meetodit ainult selle lahjenduse puhul. Väike kogus suspensiooni viiakse esimesse katseklaasi koos toitekeskkonnaga, mis on jahutatud temperatuurini 60 °C. Seejärel segatakse tuubi sisu inokulaadiga, pöörates seda peopesade vahel. Järgmiseks võtke teine ​​katseklaas, avage see ettevaatlikult põleti leegi kohal ja kasutage suuri silmuseid, et viia sinna esimesest katseklaasist kolm osa substraadist. Pärast kaela ja korgi põletamist valatakse katseklaasi sisu esimesse Petri tassi, avades anuma kaane täpselt nii palju, et katseklaasi kael selle alla pista. Vahetult pärast valamist sulgege tass ja jaotage toitainekeskkond ettevaatlikult ühtlaselt.

Pärast teise katseklaasi sisu põhjalikku segamist võtke kolmas katseklaas ja kandke aasa abil kuus osa substraadist teisest. Katseklaasi sisu valatakse tassi ja katseklaasi sisu pärast segamist kallatakse tassi. Söötmega nõusid inkubeeritakse mõne päeva pärast termostaadis 28 °C juures, lähteaines sisalduvad bakterid moodustavad kolooniaid.

Seeriaaretus. Kui näiteks on vaja bakterid mullast isoleerida, siis kasutatakse seerialahjendust. Steriilne toitainekeskkond (15 ml tassi kohta) valatakse tassidesse, 0,1 ml suspensiooni viimasest kolmest lahjendusest kantakse kõvastunud agarile ja jaotatakse klaasist spaatliga pinnale.

Bakterite isoleerimiseks suspendeeritakse 1 g mulda 9 ml vees, loksutatakse korralikult, lastakse mõni sekund settida ja suspensioonist valmistatakse seerialahjendused. Seda meetodit kasutades saab määrata mikroorganismide arvu igas proovis.

Kui leiate vea, tõstke esile mõni tekstiosa ja klõpsake Ctrl+Enter.