Pasirengimas mokyklai

Juodligės mikrobiologijos sukėlėjas. Juodligė ir jos kilmė. Mikrobiologijos paskaitų kursas

juodligė (Juodligė) - zooantropozoonozė. Jam imlūs daugelio rūšių gyvūnai, ypač žolėdžiai, ir žmonės. Infekcinis procesas daugiausia vyksta ūmiai, pasireiškiant septicemijos simptomams arba susidarant įvairaus dydžio karbunkulams.

Sukėlėjas juodligė - Tu. antracis.

Morfologija. Juodligės bacilos yra gana didelė (1-1,3 x 3,0-10,0 mikrono) lazda, nejudanti, formuojanti kapsulę ir sporą. Mikrobas pasireiškia trimis pavidalais: įvairaus dydžio vegetatyvinių ląstelių pavidalu (kapsulinės ir nekapsulinės), sporos, uždarytos gerai apibrėžtame egzosporiume, ir pavienės sporos. Preparatuose, sergančiuose ar mirusiuose nuo juodligės, kraujo ir audinių, nedažytos bakterijos yra vienalytės skaidrios lazdelės su aiškiai suapvalintais galais.

Auginimas. Juodligės bacilos augimui palankiausios yra maistinės terpės, kurių sudėtyje yra baltymų kompleksų, iš dalies hidrolizuotų iki peptonų ir polipeptidų. Bakterija taip pat gali intensyviai daugintis sintetinėse terpėse be baltymų, susidedančioje iš tam tikros aminorūgščių grupės. Kaip energijos šaltinį jis gali naudoti įvairius anglies junginius: gliukozę, sacharozę, maltozę, gliceriną ir kt.

Stabilumas. Vegetacijos ląstelių stabilumas ir išgyvenimo trukmė bei juodligės sukėlėjo sporos skiriasi. Pirmieji yra palyginti labilūs, antrieji yra gana atsparūs.

Neatidarytame lavone mikrobo vegetacinė forma dėl proteolitinių fermentų veikimo sunaikinama per 2–3 dienas, palaidotuose lavonuose ji gali išlikti iki 4 dienų, po 7 dienų bakterijų lizė baigiama net kaulų čiulpuose. Skrandžio sultyse (38 ° C) jis miršta po 30 minučių, šaldytoje -15 ° C temperatūroje jis išlieka gyvybingas 15 dienų, sūdytoje - iki 1,5 mėnesio. Srutos, sumaišytos su juodligės užkrėsto gyvūno krauju, po 2–3 valandų užmuša vegetacines ląsteles, o sporos jose išlieka mėnesinės.

Skirtingai nuo vegetatyvinių ląstelių, juodligės bacilos sporos ilgiau išlieka išorinėje aplinkoje. Sporai nuo Lange juodligės vakcinų išliko gyvybingi per 80 metų stebėjimo laikotarpį.

Toksigeniškumas. Juodligės bacilos formuoja kompleksinį egzotoksiną. Šis toksinas susideda iš trijų komponentų (faktorių), kurie žymimi: edematogeninis faktorius (EE), apsauginis antigenas (RA) ir mirtinas faktorius (LE), arba 1-, II- ir III-faktoriai. Visi jie sintetina kapsulių ir kapsulių neturinčias mikrobo versijas. Edematogeninis faktorius sukelia vietinę uždegiminę reakciją - edemą ir audinių sunaikinimą. Chemiškai tai lipoproteinas. Apsauginis antigenas - apsauginių savybių nešėjas, turi ryškų imunogeninį poveikį. Gryna forma jis nėra toksiškas. Pats mirtinas faktorius nėra toksiškas, tačiau mišinyje su antruoju faktoriumi (RA) žūva žiurkės, baltosios pelės ir jūrų kiaulytės. Apsauginis antigenas ir mirtinas faktorius yra molekuliškai nevienalyti baltymai. Visi trys toksino komponentai sudaro sinergetinį mišinį, kuris turi ir edematogeninį, ir mirtiną poveikį, kiekvienas iš jų turi ryškią antigeninę funkciją ir yra serologiškai aktyvus.

Invazines savybes lemia kapsulinis b-glutamino polipeptidas ir egzoenzimai.

Antigeninė struktūra. Juodligės bacilos antigenai apima neimunogeninį somatinių polisacharidų kompleksą ir kapsulinį glutamino polipeptidą. Polisacharidų antigenas nesukuria gyvūnų imuniteto ir nenustato agresyvių bacilos funkcijų; jis visada randamas tiek virulentiškose, tiek avirulentinėse padermėse. Dėl to, kad polisacharidas yra glaudžiai susijęs su bakterinės ląstelės kūnu, jis vadinamas somatiniu antigenu. Juodligės somatinis antigenas labai dažnai žymimas raide „C“, kapsulinis polipeptidas - „P“. Juodligės bacilos kapsulinis antigenas yra sudėtingas b-glutamo rūgšties polipeptidas ir laikomas grupei būdinga medžiaga, nes jis sukelia kryžmines serologines reakcijas su polipeptidais Tu. yandvnz, tu. segeiz ir Tu. megatenыm. Visi trys juodligės egzotoksino komponentai taip pat yra aktyvūs antigenai.

Imunitetas. Nustatyta, kad juodligės bacilos somatinis polisacharidas ir kapsulinis glutamo rūgšties polipeptidas negali sukelti apsauginių antikūnų sintezės. Šią funkciją juodligės baciloje atlieka apsauginis antigenas: būdamas vienu iš patogeniškumo veiksnių, jis lemia imuniteto susidarymą šiai infekcijai pagal antitoksinį tipą.

Dėl natūralios infekcijos ir juodligės ligos gyvūnams atsiranda ilgalaikis ir nuolatinis imunitetas.

Patogenezė. Juodligės bacilos yra labai invazinės ir lengvai prasiskverbia per įbrėžimus ant odos ar gleivinės. Gyvūnų infekcija vyksta daugiausia maistu. Per pažeistą virškinamojo trakto gleivinę mikrobas patenka į limfinę sistemą, o paskui į kraują, kur fagocituojasi ir plinta visame kūne, įsitvirtindamas limfoidinės-makrofaginės sistemos elementuose, po kurio jis vėl migruoja į kraujas, sukeldamas septicemiją.

Dauginantis kūne, juodligės bacilos sintetina kapsulinį polipeptidą ir išskiria egzotoksiną. Kapsulinė medžiaga slopina opsonizaciją, o egzotoksinas naikina fagocitus, veikia centrinę nervų sistema, sukelia edemą, dėl kurios atsiranda hiperglikemija ir padidėja šarminės fosfatazės aktyvumas.

Terminalinėje proceso fazėje deguonies kiekis kraujyje sumažėja iki tokio lygio, kuris yra nesuderinamas su gyvybe, smarkiai sutrinka medžiagų apykaita, atsiranda antrinis šokas ir įvyksta gyvūnų mirtis.

Juodligės sukėlėjas iš organizmo gali išsiskirti su bronchų gleivėmis, seilėmis, pienu, šlapimu ir išmatomis.

Juodligė yra ūmi ypač pavojinga zoonozinė infekcija. Daugiausia gyvūnų ligos, tarp kurių labiausiai jautrūs yra galvijai, avys, ožkos, elniai, arkliai. Ligos pavadinimą pasiūlė S. S. Andreevsky, susijęs su vieta, kurioje jis tyrė. Uraluose įvyko didelė epidemija 1786–1788 m.

Pirmą kartą juodligės lazdos sergančių gyvūnų kraujyje buvo rastos 1840 m. Pollenderio atradimas buvo patvirtintas 1850 m.

R. Kochas 1875 m. Pirmą kartą išskyrė gryną antiseptinių ligų kultūrą ir galiausiai nustatė šio mikrobo vaidmenį ligos etiologijoje. 1881 m. Kartu su R. Kochu dirbęs L. Pasteur gavo panašių duomenų ir, ištyręs mikrobo biologiją, sukūrė gyvos antiseptinės vakcinos paruošimo metodą šios ligos prevencijai. L.S.Tsenkovsky 1883 m. Gavo labai veiksmingą vakciną, kuri 60 metų mūsų šalyje buvo naudojama opų ligų profilaktikai tarp žemės ūkio gyvūnų.

Ligos sukėlėjo taksonomija

Šizomicetų klasė
Eeubacteriales tvarka
Bacillaceae šeima
Bacillus Antracis rūšys

Patogenų morfologija

Juodligės sukėlėjas yra didelė lazda, 5-10 mikronų ilgio, 1-2 mikronų pločio, nejudanti, gramteigiama. Skystose kaukėse, tarp bacilos, jis yra poromis arba ilgomis grandinėmis. Bacilų galai beicuotuose tepinėliuose atrodo susmulkinti. Bacilos už kūno ribų, esant nepalankioms gyvenimo sąlygoms, formuoja sporas, kurios yra ląstelės centre, turi ovalo formą ir neviršija mikrobo kūno skersmens, jos nedeformuoja. Žmonėms ir gyvūnams bacilos formuoja kapsules, kurios supa asmenis ir grandines. Kapsules sudaro specialios kultūros terpės, kuriose yra kraujo, serumo, kiaušinio baltymo ar smegenų audinio. Kapsulėje yra baltymų.

1911 ir 1912 m. Sibiro regione gyvulių juodligė buvo 100 000 gyvulių, atitinkamai 2000 ir 1671, 1908 m. Sirdarijos regione juodligė buvo užregistruota 50 arklių ir 67 galvijų galvomis.

Toksinų susidarymas

Bacilos išskiria egzotoksiną, susidedantį iš 3 veiksnių:
Uždegiminis arba edematinis.
Imunogeniškas.
Mirtina.

Sibiro opos toksinas vaidina didelį vaidmenį juodligės infekcijų patogenezėje ir patologinėje fiziologijoje, todėl jis yra susijęs su specifinio imuniteto formavimu.

Antigeninė struktūra

Baciloje yra:

O - somatinis antigenas, susidedantis iš polisocharidų
K - kapsulė - atsparus šilumai antigenas.

Gyvūnų kūne ir specialiose terpėse, kuriose yra audinių ar plazmos ekstraktų, jie gamina specialų antigeną, pasižymintį didelėmis imunizuojančiomis savybėmis.

Pasipriešinimas

Juodligės bacilos sporos yra labai atsparios, sausas garas jas 2-3 valandas žudo 140 C temperatūroje, o 120 C temperatūros autoklave jie miršta per 13-20 minučių, virdami 60 minučių. Vegetacinė juodligės sukėlėjo forma miršta, kai 40 minučių kaitinama iki 55 ° C, 15 minučių - 60 ° C, 1 minutę - 75 ° C. Tiesioginiai saulės spinduliai ir dezinfekcijos priemonės lengvai užmuša lazdą. Vegetatyvinė forma yra atspari žemai -1 ° C temperatūrai.

Patogeniškumas gyvūnams

Visų rūšių žolėdžiai yra jautrūs juodligės sukėlėjui, karvės, avys, arkliai, kiaulės ir kupranugariai - naminiams gyvūnams. Gyvūnams pasireiškia silpnumas, cianozė, kruvinos išskyros iš žarnyno, burnos ir nosies. Mirtis įvyksta 2-3 dienomis.

Klinikos liga žmonėms ir patogenezė

Inkubacinis laikotarpis trunka nuo kelių valandų iki 6-8 dienų, dažniau 2-3 dienas. Skiriamos šios formos:

Odos forma.
Plaučių forma.
Žarnyno forma.
Septinė forma.

Su žmogaus odos forma atsiranda antiseptinis karbunkulas.

Patogeno prasiskverbimo vietoje pradžioje atsiranda rausvos dėmės, virstančios vario-raudonos spalvos kapsule. Po kelių valandų kapsulė virsta niežtinčia pūsle. Būdingas skausmo nebuvimas aplinkinės edemos srityje.

Plaučių forma retai pasireiškia kaip bronchopneumonija. Mirtis dėl sepsio vystymosi.

Žarnyno forma yra reta ir pasireiškia bendru apsinuodijimu virškinimo sistemos katoriniais hemoraginiais reiškiniais. Pacientą pykina, vemia, viduriuoja kraujas.

№ 16 Juodligės sukėlėjas. Taksonomija ir charakteristikos. Mikrobiologinė diagnostika. Specifinė profilaktika ir gydymas.
Juodligė yra ūmi antroponinė infekcinė liga, kurią sukelia Bacillusanthracis, būdinga sunki intoksikacija, odos pažeidimai, limfmazgiai.
Taksonomija. Sukėlėjas priklauso Firmicutes skyriui, Bacillus genčiai.
Morfologinės savybės... Labai dideli gramteigiami strypai su susmulkintais galais grynos kultūros tepinėlyje yra išdėstyti trumpomis grandinėmis (streptobacilomis). Nejudantis; formos centre esančias sporas, taip pat kapsulę.
Kultūros vertybės... Aerobai. Jie gerai auga paprastose maistinėse terpėse 10–40 ° C temperatūroje, optimali augimo temperatūra yra 35 ° C. Ant skystos terpės duoti dugno augimą; ant tankios terpės jie suformuoja didelius, nelygiais kraštais, šiurkščias matines kolonijas (R formos). Terpėse, kuriose yra penicilino, po 3 valandų augimo juodligės bacilos sudaro grandinėlėje išsidėsčiusius sferoplastus, kurie tepinėlyje panašūs į perlų vėrinį.
Biocheminės savybės... Fermentinis aktyvumas yra gana didelis: patogenai rūgština gliukozę, sacharozę, maltozę, krakmolą, inuliną; pasižymi proteolitiniu ir lipoliziniu aktyvumu. Izoliuokite želatinazę, jos silpnas hemolizinis, lecitinazės ir fosfatazės aktyvumas.
Izoliuokite želatinazę, pasižyminčią mažu hemoliziniu, lecitinazės ir fosfatazės aktyvumu.
Antigenai ir patogeniškumo faktoriai... Turi bendrinių somatinių polisacharidų ir specifinių baltymų kapsulių antigenus. Jie sudaro antigeninių savybių baltymo egzotoksiną, susidedantį iš kelių komponentų (mirtinų, apsauginių ir sukeliančių edemą). Virusinės padermės jautriame organizme sintetina kompleksinį egzotoksiną ir didelį kiekį kapsulinės medžiagos, turinčios ryškų antifagocitinį aktyvumą.
Pasipriešinimas. Vegetacinė forma nėra atspari aplinkos veiksniams, sporos yra ypač atsparios ir išsilaiko aplinkoje, atlaiko virimą. Yra jautrūs penicilinui ir kitiems antibiotikams; sporos yra atsparios antiseptikams.
Epidemiologija ir patogenezė... Infekcijos šaltinis yra sergantys gyvūnai, dažniausiai galvijai, avys, kiaulės. Žmogus dažniausiai užsikrečia kontaktuodamas, rečiau virškinamas, slaugydamas sergančius gyvūnus, perdirbdamas gyvūnines žaliavas, valgydamas mėsą. Infekcijos vartai daugeliu atvejų yra pažeista oda, daug rečiau - kvėpavimo takų ir virškinamojo trakto gleivinės. Patogenezė pagrįsta egzotoksino veikimu, kuris sukelia baltymų krešėjimą, audinių edemą ir sukelia toksinio-infekcinio šoko išsivystymą.
Klinika. Atskirkite odos, plaučių ir žarnyno juodligės formas. Su odos (lokalizuota) forma patogeno įvedimo vietoje atsiranda būdingas juodligės karbunkulas, kartu su edema. Plaučių ir žarnyno formos yra apibendrintos formos ir yra išreikštos atitinkamų organų hemoraginiais ir nekroziniais pažeidimais.
Imunitetas. Po perkeltos ligos išsivysto nuolatinis ląstelinis-humorinis imunitetas.
Mikrobiologinė diagnostika :
Patikimiausias juodligės laboratorinės diagnostikos metodas yra patogeno kultūros išskyrimas iš tiriamos medžiagos. Taip pat diagnostinę vertę turi „Ascoli“ nuosėdų reakcija ir alerginės odos testas.
Bakterioskopinis tyrimas. Gramo dėmių tepinėlių iš patologinės medžiagos tyrimas leidžia aptikti patogeną, kuris yra gramteigiamas didelis nejudrus streptobacilas. Pacientų organizme ir baltyminėje maistinėje terpėje mikroorganizmai formuoja kapsulę, dirvožemyje, sporas.
Bakteriologiniai tyrimai. Tiriamoji medžiaga pasėjama į lėkštes su maistinėmis medžiagomis ir kraujo agaru, taip pat į mėgintuvėlį su maistinių medžiagų sultiniu. Pasėliai inkubuojami 37 ° C temperatūroje 18 valandų. Sultinyje B. anthracis auga kaip pleiskanojančios nuosėdos; ant agaro virulentiškos padermės sudaro R formos kolonijas. Avirulentiškos arba silpnai virulentiškos bakterijos sudaro S formos kolonijas.
B. anthracis pasižymi sacharolitinėmis savybėmis, hemolizuoja eritrocitus ir lėtai skystina želatiną. Veikiamas penicilino, jis suformuoja sferoplastus, kurie atrodo kaip „perlai“. Šis reiškinys naudojamas norint atskirti B. anthracis nuo nepatogeninių bacilų.
Biologinis tyrimas . Tiriama medžiaga jūrų kiaulytėms ir triušiams suleidžiama po oda. Iš kraujo ir vidaus organų paruošiami tamponai, pasėliai gaminami grynai patogeno kultūrai išskirti.
Greita diagnostika atliekamas naudojant Ascoli termorecipitacijos reakciją ir imunofluorescencijos metodą.
Jei reikia, Ascoli reakcija diagnozuojama mirusiems gyvūnams ar mirusiems žmonėms. Tiriamosios medžiagos pavyzdžiai susmulkinami ir virinami mėgintuvėlyje su izotoniniu natrio chlorido tirpalu 10 minučių, tada filtruojami, kol visiškai skaidrūs.
Imunofluorescencijos metodas atskleidžia B. anthracis kapsulių formas eksudate. Praėjus 5–18 valandoms po gyvūno užkrėtimo, eksudato tepinėliai apdorojami kapsuliniu juodligės antiserumu, o po to - fluorescuojančiu anti-triušio serumu. Preparatuose, kuriuose yra kapsulinių bacilų, pastebimas geltonai žalias patogeno švytėjimas.
Odos alergijos testas. Jis dedamas ant vidinio dilbio paviršiaus - į odą suleidžiama 0,1 ml antraksino. Esant teigiamai reakcijai, hiperemija ir infiltracija atsiranda po 24 valandų.
Gydymas: antibiotikai ir juodligės imunoglobulinas. Gydant antibiotikais, pasirinktas vaistas yra penicilinas.
Prevencija. Specifinei profilaktikai naudojama gyva juodligės vakcina. Skubiai profilaktikai skiriamas juodligės imunoglobulinas.
Juodligę nusodinantis serumas. Gaunamas iš triušio, hiperimunizuoto B. anthracis kultūra, kraujo. Jis naudojamas formuluojant Ascoli termorecipitacijos reakciją.
Juodligės gyvos vakcinos LPI. Džiovinta gyvų B. anthracis avirulentų be kapsulių kamienų sporų suspensija. Jis naudojamas siekiant išvengti juodligės.
Juodligės imunoglobulinas. Arklio kraujo serumo gama globulino frakcija, hiperimunizuota gyva juodligės vakcina ir virulentine B. anthracis paderme, naudojama profilaktikos ir terapijos tikslais.

Šie patogenai sukelia infekcijas, priklausančias ypač pavojingų grupei (bakterinės infekcijos yra maras, cholera, juodligė, tuliaremija, liaukos ir bruceliozė).

Juodligė.

Juodligės sukėlėjas - Bacillus anthracis priklauso Bacillaceae šeimos Bacillus genčiai (baciloms).

Morfologija. Didelis gramteigiamas strypas, dažnai suapvalintais galais. Skirtingai nuo kitų bacilų, ji yra nejudri ir gerai dažoma anilino dažais. Klinikinėse medžiagose jie yra išdėstyti poromis arba trumpų grandinių pavidalu, apsupti bendros kapsulės (susidariusios tik žmonėms ir gyvūnams arba specialiose terpėse su krauju, kraujo serumu). Žiniasklaidoje patogenas formuoja ilgas grandines „ bambukinė nendrė“(Su patikslinimais ląstelių galuose ir sąnariuose). Ant agaro, kurio sudėtyje yra penicilino, ląstelių sienos yra sunaikintos, sferiniai protoplastai formuojami grandinių pavidalu ( perlų vėrinys“). Juodligės sukėlėjas formuoja endosporas, kurios yra centre, jų skersmuo neviršija bakterinės ląstelės skersmens. Sporos susidaro tik už kūno ribų, esant deguoniui (prieigai) ir tam tikroje temperatūroje (nuo +12 iki +43 o C, optimaliausia esant 30-35 o C). Ginčai rodo labai didelį išorinės aplinkos stabilumą (dešimtmečius). Juodligė pirmiausia yra dirvožemio infekcija.

Kultūros vertybės. Ligos sukėlėjas auga aerobinėmis ir fakultatyvinėmis anaerobinėmis sąlygomis. Optimali temperatūra yra + 37 ° C, pH -7,2-7,6. Auga paprastose maistinėse terpėse, įskaitant. ant bulvių, šiaudų užpilo, grūdų ir ankštinių augalų ekstraktų. Sėja su želatinos injekcija („ apverstas silkinis kaulas“). Virusinės R formos ant tankių terpių sudaro grubias pilkai baltas pluoštinės struktūros kolonijas („ medūzos galva"arba" liūto kailis“). Skystoje terpėje susidaro nuosėdos vatos gumulėlio pavidalu. Juodligė taip pat gali formuoti lygias (S), gleivėtas (M) arba mišriąsias (SM) kolonijas, ypač mikroaerofilinėmis sąlygomis. S formos sukėlėjas praranda virulentiškumą.

Biocheminės savybės. B.anthracis yra labai biochemiškai aktyvus. Jis fermentuoja gliukozę, sacharozę, maltozę, trehalozę, kad susidarytų rūgštis be dujų, formuoja vandenilio sulfidą, varškina ir peptonizuoja pieną.

Antigeninė struktūra. Skiriamos trys pagrindinės antigenų grupės - kapsulinis antigenas, toksinas (koduojamas plazmidžių, jei jų nėra, padermės yra avirulentiškos), somatiniai antigenai.

Kapsulės antigenai chemine struktūra skiriasi nuo kitų bakterijų K-antigenų, polipeptidinio pobūdžio, susidaro daugiausia organizme-šeimininke.

Somatiniai antigenai- ląstelės sienelės polisacharidai, termiškai stabilūs, ilgai išlieka aplinkoje, lavonuose. Jie identifikuojami Ascoli terminio nusodinimo reakcijoje.

Toksinas apima apsauginį antigeną (skatina apsauginių antikūnų sintezę), mirtiną faktorių, edematinį faktorių.

Patogeniniai veiksniai- kapsulė ir toksinas.

Trumpos epidemiologinės charakteristikos. Juodligė yra zoonozinė infekcija. Pagrindinis žmonių šaltinis yra žolėdžiai gyvūnai. Jų infekcija vyksta daugiausia per maistinį kelią, sporos ilgai išlieka dirvožemyje, o gyvūnai jas praryja daugiausia su pašarais ir žole). Juodligės galvijų laidojimo vietos yra ypač pavojingos (jose sporos išlieka ilgą laiką, jas suplyšus, išplaunant ir vykstant kitiems procesams, jos patenka į dirvos ir augalų paviršių). Asmuo užsikrečia kontaktuodamas su užkrėstomis medžiagomis (slaugydamas sergančius gyvūnus, pjaustydamas ir valgydamas užkrėstus mėsos produktus, kontaktuodamas su juodligės gyvūnų odomis ir kt.).

Pagrindinės klinikinės apraiškos formos priklauso nuo įėjimo infekcijos vartų - odos (karbunkulo), žarnyno, plaučių, septiko. Būdingas didelis mirtingumas (mažiau odos pavidalu).

Laboratorinė diagnostika. Medžiaga pacientų tyrimams priklauso nuo klinikinės formos. Odos formos atveju tiriamas pūslelių turinys, karbunkulo išsiskyrimas ar opos, žarnyno forma - išmatos ir šlapimas, su plaučių - skrepliais, su septiniu - krauju. Tiriami išorinės aplinkos objektai, gyvūnų medžiaga, maisto produktai.

Bakterioskopinis metodas yra naudojami gramteigiamiems lazdelėms, apsuptiems kapsule, aptikti žmonių ir gyvūnų medžiagose, sporose iš išorinės aplinkos daiktų. Dažniausiai naudojamas fluorescencinių antikūnų (MFA) metodas, leidžiantis aptikti kapsulinius antigenus ir sporas.

Pagrindinis metodas yra - bakteriologinis Jis naudojamas ypač pavojingų infekcijų laboratorijose pagal standartinę schemą, įskiepijant ant paprastų maistinių medžiagų (MPA, mielių terpė, GKI terpė), nustatant judrumą, Gramo dažymą ir tiriant biochemines charakteristikas. Diferencijuojant nuo kitų Bacillus genties atstovų, būtinas biologinis mėginys. Baltosios pelės žūva per dvi dienas, jūrų kiaulytės ir triušiai - per keturias dienas. Taip pat apibrėžkite bakteriofago tinkamumas, jautrumas penicilinui (perlų vėrinys). Retrospektyviai diagnostikai, serologiniams tyrimams, naudojamas alerginis tyrimas su antraksinu, siekiant nustatyti somatinį antigeną - Ascoli reakciją, kuri gali būti veiksminga esant neigiamiems bakteriologinių tyrimų rezultatams.

Gydymas. Jie naudoja juodligės imunoglobuliną, antibiotikus (penicilinus, tetraciklinus ir kt.).

Prevencija. Naudojama gyva be sporų vakcina be kapsulių STI, apsauginis antigenas.

Rusijos Federacijos mokslo ir švietimo ministerija

Moskovsky Valstijos universitetas taikomoji biotechnologija

Mikrobiologijos ir imunologijos katedra

Kursinis darbas

"Juodligės sukėlėjas"

Baigta: studentas veterinaras-san. f-tai

II kursas, 9 grupės

M.V.Budantsevas

Patikrinta:

Prof. D. I. Skorodumovas

Maskva 2005 m

Įvadas

1. Ligos sukėlėjo charakteristikos

1.1 Morfologinės savybės

1.2 Fermentinė veikla

1.3 Antigeninė struktūra

1.4 Patogeno stabilumas

2. Evoliucija

Išvada

Bibliografija

Įvadas

Juodligės sukėlėjas - Bacillus anthracis - priklauso Eubacteriales būriui, Bacillacae šeimai, Bacillus genčiai ir porūšiui. Bacilą pirmą kartą mikroskopu atrado F. Pollenderis Vokietijoje 1849 m.

K. Davinas ir Hansas Prancūzijoje avių, mirusių nuo juodligės, kraujyje nustatė gijinius nejudančius kūnus (cilindrines lazdeles). Rusijoje F. Brauelis 1857 m. Žmogaus, mirusio nuo juodligės, kraujyje rado lazdelių (vibrių) ir eksperimentiškai reprodukavo gyvūnų ligą, užkrėtęs juos krauju, kuriame buvo šių mikrobų. Bet lazdelių reikšmė liko neaiški. Tik 1863 m. K. Davepas galutinai nustatė, kad jie yra juodligės sukėlėjas. Šie metai laikomi oficialia juodligės bacilos atradimo data.

Patogenų kultūra buvo gauta tik 1876 m. Pirmiausia - R. Kochas, o paskui - L. Pastoras. Nepriklausomai vienas nuo kito, jie užkrėtė gyvūnus šia kultūra, daugino ligą ir atrado, kad juodligės lazdelės gali formuoti sporas. 1888 m. Serafini atrado kapsulę juodligės bacilose. Rusijoje juodligės mikrobo kultūrą pirmą kartą gavo V.K. Vysokovičius (1882).

Bacillus gentis vienija 48 aerobinių arba fakultatyvinių anaerobinių bacilų rūšis, kurios yra suskirstytos į dvi grupes: pirmajai priklauso 22 rūšys, antrajai - 20 rūšių. Geriau studijuoti, pirmosios grupės bacilos. Arčiausiai juodligės bacilos rūšys yra: Vas. cereus yra vaškinė bacilos tu. cereus var.mycoides sive - šaknies bacilos; Tu. megateriumas - kopūstinė bacila; Tu. subtilis sive - šieno bacilos; Tu. pumilus sive yra bulvių bacilos. Visi jie yra saprofitai, išskyrus jus. sereus, kuris sintetina aktyvų patogeninį fermentą lecitinazę ir gali sukelti maisto toksikozę.

1. Ligos sukėlėjo charakteristikos

1.1 Morfologinės savybės

Nedažytuose preparatuose, paruoštuose nuo juodligės sergančių ar negyvų gyvūnų kraujo ir audinių, bacilos turi homogeniškų skaidrių lazdelių formą su šiek tiek suapvalintais galais. Jie guli vieni arba sujungti trumpomis grandinėmis. Ląstelių skaičius grandinėje labai virulentiškose padermėse paprastai neviršija trijų, o mažai virulentiškų padermių jų gali būti daugiau.

Bacilos, išaugintos ant kietų ar skystų maistinių medžiagų, sudaro skirtingo ilgio grandines. Tepant štamų kultūras, kurios skystose maistinėse terpėse davė būdingą pleiskanų nuosėdų pavidalą, strypai dažniau išsidėstę ilgose grandinėse, o kultūrose, pagamintose iš netipinio difuzinio augimo kultūrų, jos sudaro trumpas grandines. Grandinių ląstelės nėra vienodo dydžio ir primena cilindrus. Ląstelių paviršius nelygus.

Spalvotose grandinėse lazdelių galai, nukreipti vienas į kitą, yra tiesūs, tarsi nupjauti, o laisvieji galai yra šiek tiek suapvalinti. Bacilos, sintetindamos kapsulę augindamos terpę, kurioje yra baltymų, ir dauginasi gyvūnų kūne, formuoja grandines bambuko lazdelės pavidalu, susmulkinti ląstelių galai yra šiek tiek prislėgti ir simetriškai sustorėję sąnariuose.

Bacilos turi branduolį. F.Ya. Kitaev (1922) nustatė, kad jis dalyvauja vegetatyvinių ląstelių dalijime ir dažnai būna daiginančiose sporose. Vėliau branduolio buvimą baciloje patvirtino Flewettas (1948). 1959 m. M.P. Meisel ir L.V. Mirolyubovas nustatė, kad branduolys susideda iš spiralinių gijų, užimančių centrinę ląstelės dalį ir išsidėsčiusių išilgai jos ašies. Nukleoidą daugiausia vaizduoja fibrilų tinklas, esantis atsitiktinai, tolygiai visame jo plote. Chatterjee ir Williams (1962) nurodo, kad jaunų kultūrų ląstelėse chromatino kūnai atrodo ilgų ištisinių darinių, esančių centre. Subrendusiose ląstelėse jie yra nepertraukiami ir; ir perpus. 24 valandų kultūrų ląstelėse ilgi chromatino kūnai yra dideliuose sferinių darinių kompleksuose. Autoriai padarė išvadą, kad juodligės bacilos turi atskirą diferencijuotą nukleoidą.

Nukleoido diferenciaciją patvirtino G. V. Dunaevas (1967, 1972), atlikdamas Zenkovsky vakcinos ir STI-1 padermių vegetatyvinių ląstelių fiksavimą ir dažymą Pekarsky-Robinow metodu. Bacilose visuose jų vystymosi etapuose buvo rastas gerai kontūruotas nukleoidas. Branduolio struktūra ypač gerai atsiskleidžia atliekant kombinuotą liuminescencinę ir falopauzinę mikroskopiją. DNR ir RNR yra bacilose, pirmoji yra nukleoide, antroji - citoplazmoje.

DNR chromosomos molekulė yra dviguba grandinė, uždaryta žiede ir savotiškai supakuota pluoštinės grandinės, panašios į susuktą šiaudų ryšulį, pavidalu. Kompaktišką DNR formą palaiko vienos grandinės ribonukleino rūgštis, kuri savo ruožtu siejama su RNR polimeraze ir katijoniniais baltymais. Pailgos DNR nukleoidinės molekulės ilgis beveik 2 kartus viršija pačios bacilos ilgį.

Pirmą kartą Rothas ir Williamsas pranešė apie juodligės bacilų submikroskopinę struktūrą (1963, 1964); jie rado atskiro nukleoido elementus mikrobo vegetacinėse ląstelėse. Tada nemažai sovietų ir užsienio tyrėjų (Pavlova ir Kats, 1966; Mobery, Shafa ir Gerchardi, 1966; Belokozov, 1970; Tretsetskaya ir Kulikovskii, 1972 ir kiti) tyrė virulentų (Nr. 66 ir 2222) ir vakcinos struktūrą. (II Tsenkovsky vakcina, STI-1, Stern) bacilų padermės.

Akivaizdu, kad bacilos, galinčios vegetuoti išorinėje aplinkoje ir gyvūnų organizme, turi labai išvystytus reguliavimo mechanizmus, užtikrinančius mainus ir gyvybinę veiklą pasikeitus aplinkai. Tobula adaptacijos sistema priklauso nuo ląstelės morfologinės struktūros. Bacilos sienelę sudaro trys sluoksniai: du osmiofiliniai ir vienas osmiofobiniai. Bet tokia struktūra ne visada atskleidžiama. Dažniau sieną sudaro vidiniai osmiofiliniai, tankesni ir išoriniai, vidutiniškai tankūs sluoksniai. Išorinis sluoksnis dažnai virsta fibrilinėmis struktūromis, išsidėsčiusiomis visame ląstelės paviršiuje. Manoma, kad šie osmiofiliniai fibriliniai dariniai yra kapsulių likučiai.

Ląstelės sienelėje yra matomos kanalėlės, jungiančios su citoplazmos membrana ir atsiveriančios į išorinę aplinką.

Citoplazminė membrana yra lygi arba šiek tiek vingiuota. Tik kai kuriose ląstelės dalyse pastebimi trys jos sluoksniai; jie geriau matomi lizuojamose bacilose. Dažniau membrana yra glaudžiai greta ląstelės sienos, ir ji atsiskleidžia kaip vienas sluoksnis. Membrana turi iškilimų į citoplazmą, skiriasi forma, dydžiu, struktūra ir lokalizacija; jie apibūdinami kaip intracitoplazminės membranos struktūros. Iškyšos yra garbanos, ovalios ir nelygios linijos, daugelyje bacilų jos prasiskverbia į nukleoidinę zoną.

Bacilų citoplazmoje yra aiškiai kontūruotos vakuolės. Paprastai jie yra dideli, juos riboja membrana, kuri jiems tarnauja kaip rėmas. Ribosomos guli išorėje. Jie išsidėstę grandinėmis, formuodami poliribosomas. Pastarieji geriau matomi lizuojamose ląstelėse. Dažnai vakuolės yra sutelktos šalia nukleoido. Gerhardi (1967) mano, kad vakuolės atsiranda dėl tirpimo lipidų inkliuzų fiksavimo ir dehidracijos procese ir, visų pirma, poli-ß-hidroksibutirūgšties granulių.

Bacilose yra lipoproteinų granulių, esančių daugiausia pogrindyje ir gale. Taip pat buvo nustatytos mezosomos (mitochondrijų ekvivalentai). Jie turi aiškiai kontūruotas, ryškiai švytinčias geltonai žalias granules, besiliečiančias su citoplazmos membrana. Mesosomos yra daugiafunkcinės. Bacilų membraninė-mezosominė sistema yra atsakinga už oksidacinį fosforilinimą, elektronų perdavimą ir di- bei trikarboksirūgščių ciklą; ji taip pat dalyvauja baltymų sintezėje (Burd, 1967; 1968). Citoplazmoje, nudažius sendintu metileno mėlynojo tirpalu pagal Lefflerį, bacilos poliarinėse srityse, o kartais ir centrinėje dalyje, randamos valachino granulės, nudažytos metachromatiniu būdu.

Dažant juodu Sudanu, pastebimos lipidų granulės, kurių ypač gausu sporuliacijos laikotarpiu. Jų yra sporas formuojančiose visų rūšių aerobinėse bacilose, įskaitant saprofitus. Citocheminė Hotchkiss pa polisacharidų reakcija atskleidžia mažas glikogeno granules. Jų yra tiek paprastose, tiek sporas formuojančiose bacilose.

Bacilos dauginasi dalijant. Ląstelėje susidaro skersinė pertvara, kuri ją padalija į du vienodos pusės individus. Pertvaros susidarymas prasideda nuo citoplazminės membranos įsitraukimo ir ląstelės sienos įtraukimo į šį procesą. Pamažu, atrodo, kad kamera yra suvarstyta. Tačiau dažnai prieš baigiantis pirmajam dalijimui prasideda naujas ląstelių dalijimasis, dėl kurio susidaro streptobatspla. Gautą grandinę sudaro skirtingo ilgio ląstelės.

Bacilos išskiria egzotoksiną, kuris vaidina pagrindinį patogenezinį vaidmenį vystantis ligai. Egzotoksino biosintezės ir sekrecijos procese, auginant bacilas specialiose terpėse, pastebimas intensyvus ribosominio ir membraninio-mezosominio aparato vystymasis, tarp jų užsimezga glaudus ryšys, o intracitoplazminės membranos struktūros prasiskverbia į nukleoidinę zoną. Eksponentinio augimo fazėje kultūra daugiausia susideda iš neskaidančių ląstelių (Dunaev, 1972).

Nukleoidinėje zonoje pastebimas didelis osmofilinių masių kaupimasis. Kai kuriose ląstelių srityse randami intracitoplazminiai kanalai, kurie morfologiškai skiriasi nuo šios rūšies mikrobų įprasto tipo membranų struktūrų. Jie tiesūs, trumpi. Kanalai praeina per ląstelės sienelę ir bendrauja su aplinka. Aptinkamos pavienės ląstelės su lizuotu protoplastu, tačiau gerai išsilaikiusiomis membranos struktūromis. Šios ląstelės dažnai turi sunaikintos ląstelės sienos plotus.

Šioje fazėje bacilos išskiria toksiną. Jis gali būti transportuojamas iš baciliarinės ląstelės trimis būdais: toksinas išsiskiria specialiais kanalais, per nesulaužytą, bet pakitusią ląstelės sienelę ir lizuojamos ląstelės sienos sekcijomis. Bacillus plazmoje yra kompaktiškų osmiofilinių dalelių intarpai. Už mikrobo ribų jie yra mažiau optiškai tanki materija, taip pat išskiriamas bacilų. Didėjant atstumui nuo bacilos, dalelės tampa didesnės, o atstumas tarp jų didėja. Apibūdinta bacilos struktūra būdinga vakcinoms ir virulentinėms juodligės padermėms: opoms.

Kapsulių susidarymas. Bacilos gyvūno kūne ir auginamos maistinėse terpėse, kuriose yra daug vietinių baltymų suformuokite kapsulę. Esant atmosferos deguoniui, jis nesusidaro. Kapsulė yra išorinis bacilos gleivinis sluoksnis, ji laikoma ektoplazmos sluoksniu. Ultra pjūviuose jis matomas kaip kompaktiškas storas sluoksnis, glaudžiai greta vegetacinės ląstelės sienos.

Kapsulę sudaro keli sluoksniai. Vidinę jo dalį sudaro rūgštiniai mukopolisacharidai, vidurinę - baltymų-polisacharidų kompleksai, išorinę - mukopeptidai ir polipeptidai. Išoriniuose kapsulės sluoksniuose ir ląstelės membranoje mukopeptidai skiriasi savo savybėmis. Kapsulė, susidedanti iš 98% vandens, turi apsauginį osmosinį poveikį nuo didelio vandens kiekio antplūdžio į bacilą ir apsaugo ją nuo dehidratacijos, taip pat nuo įvairių aplinkos poveikių, įskaitant organizmo imuninius mechanizmus. Kapsulė apsaugo nuo fagocitozės

Tu. anthracis ir prisideda, anot N.N. Ginsburgas ir kt. (1960), pritvirtindami juos prie makroorganizmo ląstelių. Manoma, kad tai lemia bacilos virulentiškumą. Kapsulės neturinčios juodligės bacilos neturi šių savybių. Kapsulė susidaro tiek skystose, tiek kietose išrūgų kultūros terpėse. Augant Gladstone ir Fields terpėje, kapsulę po 3 valandų inkubacijos pradeda aptikti kai kurios bacilos (Mashkov and Bodisko, 1958), o iki 14–10 valandų beveik visos jos turi. Tada yra kapsulės medžiagos difuzija nuo ląstelių paviršiaus į aplinka... Kapsulės taip pat gerai susidaro auginant bacilos arklio kraujo serume pagal Schaefer, ant serumo agaro, ypač su CO2 pertekliumi, taip pat auginamos baltyminėse terpėse, naudojamos apsauginiam antigenui gauti. Šiuo atveju kapsulė susidaro po 2 "/ 2 valandų augimo, ir šis procesas gerai pasireiškia šešių valandų kultūroje; kapsulės taip pat randamos ląstelėse po 24 valandų augimo. GCI baltymo terpė yra pasirenkamas kapsulių biosintezės substratas. Kapsulių formavimasis, be natūralių baltymų, skatina šarminę aplinką ir CO2 buvimą. Eastinas, Thorne (1963) nustatė CO2 poveikį kai kurių mitochondrijų bacilų fermentų aktyvumui. Virusinės bacilos reikalinga didesnė CO2 koncentracija, kad susidarytų kapsulinis polipeptidas.

Svarbiausio virulentiškumo faktoriaus - kapsulių - sintezei reikalingos aminorūgštys leucinas, valinas ir metioninas. Siekiant optimalaus virulentiškų bacilų padermių dauginimo, reikalingi hipoksantinas, metioninas, alannas ir triptofanas. Virulentiškumo laipsnį daugiausia lemia bacilos augimo sąlygos ir terpės sudėtis.

Virulentinių vakcinos štamų kultūros eksponentiniame augimo etape kartu su kapsulėmis taip pat aptinkamos be kapsulių bacilos. Tai rodo, kad skirtingų genetinių savybių mutantai atsiranda padermių populiacijoje be glutamo rūgšties kapsulinio polipeptido.

Gyvūno kūne bacilos su kapsulėmis randamos praėjus 2-3 valandoms po užkrėtimo, tačiau per šį laikotarpį jų yra tik injekcijos vietose ir regioniniuose limfmazgiuose. Jie yra apsupti audinio detrito ir yra vietose (šviesoje), kuriuos džiugina mikrobų toksino veikimas. Bacilai patekus į imuninį organizmą, atrodo, kad kapsulės formuojasi labai lėtai ir gana retai. Morfologiškai bacilų kapsulės, kurios dauginasi kūne ir išaugo ant maistinių medžiagų, tačiau turi skirtumų, tik pastarosiose kapsulė yra masyvesnė. Kapsulė yra atsparesnė irimo procesams nei pati bacilos, todėl pūvančiame nuo juodligės nugaišusio gyvūno lavone randami tik „mikrobų šešėliai“, tuščios kapsulės.

Ginčų formavimas. Biologinis vaidmuo ginčijamasi dėl to, kad jie yra tam tikros rūšies bacilų išsaugojimas nepalankiomis egzistavimo sąlygomis. Sporos gamtoje gali būti ilgą laiką, todėl ilgą laiką išsaugo pirminių ląstelių (genomo) genetinės informacijos substratą ir taip užtikrina pagrindinių savybių perdavimą kitų kartų palikuonims.

Sporos susidaro aplinkoje, kurioje vyksta neutrali ar šiek tiek šarminė reakcija su baltymų medžiagų trūkumu. Sporos susidaro druskingame, distiliuotame vandenyje, nefiksuotuose tepinėliuose. Nustatyta, kad šis procesas vyksta greičiau aplinkoje, kurioje yra gryno deguonies, nei tada, kai kultūra aeruojama atmosferos oru. Susiformavęs ginčas prasideda nuo to momento, kai terpėje baltymų ir mineralinio azoto formų santykis pasislenka link pastarųjų paplitimo (Egorov ir Siitsin, 1961). Į terpę įpylus neutralaus natrio oksalato, suaktyvėja sporuliacija, o 1% kalcio chlorido tirpalas slopina. Sporos nesusidaro aplinkoje, kurioje gausu baltyminių medžiagų, tokių kaip kraujas ir serumas, gyvame organizme ir neatidarytame lavone. Pažeidus lavono vientisumą, galima sporuliacija.

Kiekvienoje vegetacinėse ląstelėse, kurios formuoja sporas (sporangijas), yra po vieną sporą, esančią centralizuotai arba po žeme. Sporos skersmuo neviršija bacilos pločio. Sporos susidaro prasidėjus vegetatyvinei ląstelei pereinant į stacionarią augimo fazę, tuo tarpu pastebimi keli nuoseklūs etapai:

1. Ląstelėje susidaro du nukleoidai, kurie netrukus susijungia į lazdelės formos darinį.

2. Vienoje ląstelės srityje atsiranda iškyšos ląstelės membrana su mezosoma. Jie suformuoja skersinę pertvarą, kuri nuo likusios ląstelės atskiria citoplazmos dalį ir DNR, kurioje nėra lipoproteino grūdelių. Dėl to būsimos sporos vieta yra izoliuota, apsupta membrana.

3. Izoliuotą plotą supa ląstelės membrana; susidaro dvigubos membranos prosporas.

4. Tarpas tarp sporos ir ląstelės (antrosios) membranų plečiasi, jos turinys tampa vienalytis, atsiranda vadinamoji žievė, dėl kurios mikroskopinio tyrimo metu spora yra geriau matoma.

5. Aplink žievę dengiančią išorinę membraną susidaro apvalkalas. Iš visų sporų struktūrų jis turi didžiausią gebėjimą išsklaidyti elektronus. Tada sporinė membrana padengiama laisvesniu ir plonesniu sluoksniu - egzosporiumu. Susiformavusi spora palieka bacilą, plyšus ląstelės sienelės daliai. Bacilos viduje sporos nedygsta.

Taigi suformuotas ginčas susideda iš šių pagrindinių sluoksnių:

Sporoplazma (jos centrinė dalis). Jis susideda iš vienalytės medžiagos su smulkiagrūdėmis osmiofilinėmis granulėmis; nukleoidas aptinkamas kaip neryški osmiofobinės medžiagos zona;

Citoplazminė vidinė membrana, supanti sarkoplazmą;

Žievė, esanti ant citoplazminės membranos paviršiaus. Jį vaizduoja masyvus lengvas optinis sluoksnis ir jis susideda iš peptidoglikano. Korpusas susidaro iš jo vidinio sluoksnio, kai spora dygsta:

Sporos išorinė dvisluoksnė membrana yra stora ir dengianti žievę;

Citoplazmos sluoksnis tarp išorinės membranos ir voko

Sporų kriauklės, pasak I.I. Belokonova (1970), T.A. Tretsetskaya, L.V. Kulikovsky (1972), jis turi iki 6 sluoksnių; vidinė apvalkalo pusė ribojasi su išorine sporos membrana, o išorinė pusė turi daugybę iškyšų;

„Exosporium“.

Sporos yra ovalios, kartais suapvalintos formacijos, kurios stipriai laužo šviesą. Ankstyvųjų sporų ilgis yra 1,2-1,5 µm, plotis - 0,8-1 µm, nesubrendusių sporų (sporų) yra šiek tiek mažiau. Brandžios sporos, nuspalvintos chromu arba kontrastingos su fosforo-volframo rūgštimi, elektronų mikroskopu aptinkamos optiškai nepraeinamų darinių, turinčių nelygius kontūrus, pavidalu; jaunesnės sporos ir sporos yra vienalytės, tamsios. Anglies kopijos metodas pagal Bredli ir Williams (1957) atskleidžia šonkaulius ant sporų paviršiaus. Jie išsidėstę išilgai arba ląstelių pavidalu ir yra ryškesni senų kultūrų (15 dienų) sporose (Belokonov, 1970). Shafa ir Sato (1966), ištyrę Sterno padermę, eksosporiumo paviršiuje atskleidė villius. Jų buvimas patvirtintas

I.I. Belokonovas (1970), kuris mokė LPI-1 ir II Tsenkovsky vakcinos štamų.

Vakcinos kamieno STI-1 sporose rasta garų sporų kūnų, panašių į tuos, kurie anksčiau buvo aprašyti kai kuriuose saprofitinius sporas formuojančiuose mikrobuose. Jie turi taisyklingą sferinę formą, yra ant sporų paviršiaus arba guli atskirai. Jų skersmuo yra skirtingas: mažas 1200. A, vidutinis 1564 A ir didelis 2000 A. Šių kūnų reikšmė nebuvo išaiškinta (Dunaev ir Belokonov, 1968).

Sporų susidarymo pradžia priklauso nuo padermės savybių ir aplinkos temperatūros. Esant 30–37 ° C temperatūrai, jis paprastai baigiasi po 1–2 valandų, 24 ° C - po 16 valandų, 18 ° C temperatūroje - iki 70 valandų. Žemesnėje nei 15 ° C ir aukštesnėje nei 42 ° C sporos nesusidaro. atsirasti. Kai kuriose padermėse šis procesas intensyviai prasideda po 18-20 valandų nuo terpės inokuliacijos ir auginimo 37 ° C temperatūroje (Belokonov, 1970; Avakyan, Katz, Pavlova, 1972). Tankioje terpėje sporos formuojasi greičiau nei skystose terpėse. Jų susidarymo procesas gerai sporuojančiose padermėse MPA paprastai baigiasi per 48–72 valandas.

Sporų daigumui reikalingos aminorūgštys (azoto šaltinis), angliavandeniai (ypač gliukozė) ir nukleorūgščių pirmtakai, 1-alaninas ir 1-tirozinas (Zemskov et al., 1972).

Morfologiniai pokyčiai, rodantys sporų dygimo pradžią, nustatomi praėjus 5-10 minučių juos pasėjus į maistinę terpę (37 ° C temperatūra). Joms būdingas sporų patinimas ir mažų lengvų plotų išvaizda palei jų periferiją. Dygstanti spora praranda blizgesį, įgauna sferinę formą, tada vėl išsitiesia ir iš vieno jos galo išilginės ašies kryptimi išlenda bacilos, išmesdama sporos apvalkalą; atsirandanti bacilos yra panaši į motinos juodligės bacilą, tik jos galai yra labiau suapvalinti.

Cheminė sudėtis. Sausose vegetatyvinių ląstelių liekanose yra 6,8% azoto ir 12-13,5% mineralinių pelenų, sausose sporų likučiuose yra atitinkamai 12,14 ir 41,15%. DNR kiekis skiriasi priklausomai nuo padermės. Dauguma aukštas lygis RNR bakterijose stebima eksponentinio augimo fazėje. Juodligės bacilos turi fermentų: lipazę, diastazę, proteazę, želatinazę. dehidrazė, citochromo oksidazė, peroksidazė, katalazė, arginazė ir kt.

Iš mikrobo kūno buvo išskirtas somatinis antigenas, į kurį įeina polisacharidas, kuriame ekvimolekulinėmis proporcijomis yra N-acetilglukozamino ir galaktozės, taip pat nedidelis kiekis 0-acetilo ir aminorūgščių liekanų.

Juodligės mikrobo apvalkalo ir kapsulės sudėtyje buvo rasti 3 antigeniniai kompleksai:

kapsulės paviršiaus antigenai, kurie, matyt, yra peptidai, jautrūs pepsino ir iš dalies tripsino veikimui;

faktiškuose kapsulės antigenuose, esančiuose pagrindiniame kapsulės sluoksnyje, yra baltymų-polisacharidų pobūdžio medžiagų, jautrių tripsino, chemotripsino, hialurondazės ir lizocimo veikimui;

ląstelių sienelių antigenai, turintys tiek polisacharidinio, tiek baltyminio pobūdžio medžiagų, jautrių lizocimo ir tripsino veikimui (Levina ir Katz, 1964; Lvakyan ir kt., 1907).

Pasak E.P. Levina ir L.P. Katz, antigenai, aptikti fluorescuojančiu juodligės serumu, yra lokalizuoti voke. Ginčuose yra alanino raceleazės, nukleozidų ribozidazės, adenozino desamnazės. Ramybės sporose šie fermentai suteikia mažą jų kiekį energijos mainai(kvėpavimas).

1.2 Fermentinė veikla

Iš didelės dirvožemyje esančių aerobinių bacilų grupės tik Bacillus anthracis įgijo ryškiausias virulentines savybes ir sugebėjimą sukelti mirtiną gyvūnų ir žmonių ligą. Jis turi daug panašių morfologinių ir kultūrinių savybių su šiais nepatogeniniais sporas formuojančiais mikrobais. Bacillus anthracis ir jūs turite daug identiškų bruožų. segeus. Yra daug faktinės medžiagos apie jūsų toksikogeniškumą. segmentas ir jo biocheminis aktyvumas.

Elektronų mikroskopinis abiejų bacilų tyrimas (Shakhbanov, 1975) atskleidė bendrus būdingus ir netipinius požymius. Taigi ląstelių siena Bac. antracis yra storesnis, o viduje yra fibrilinės medžiagos, ir jūs. cereus, ant sienos yra grybus primenančios ataugos. I.B. Pavlova ir L.P. Katz (1966) atpažino Bac. antrakai turi labiau išsivysčiusias membranų struktūras, kurias, jų nuomone, lemia didesnis redokso fermentų aktyvumas. Tu. cereus priešingai nei Bacas. anthracis greitai koaguliuoja vištienos kiaušinio trynio tirpalus; turi itin aktyvią lecitinazę. Jis lėtai redukuoja metileno mėlyną, silpnai sumažina nitratų ir nitritų kiekį, gamina želatinazę ir proteazę, gana greitai hidrolizuoja želatiną ir varškuotas išrūgas.

1.3 Antigeninė struktūra

Tu. anthracis dar nėra tinkamai ištirtas.

N.F. Gamaleya (1928) nustatė, kad patogeno įvedimo vietoje susidariusioje poodinėje edemoje yra nuodingų medžiagų, kurios, patekusios į kraują, sukelia greitą triušio mirtį. Watson, Bloom (1947) gavo ištraukas iš triušių edemos su juodlige. Sušvirkštus gyvūnams ištraukas į odą, užfiksuoti tie patys histologiniai pokyčiai, kaip ir užkrėtus gipso bacilomis. Triušiams šie ekstraktai sukėlė imuniteto susidarymą; silpnu laipsniu jis pasireiškė jūrų kiaulytėmis ir baltosiomis pelėmis.

Watsonas ir Co11 (1947) baciloje nustatė dvi medžiagas, jos skyrėsi fizine, chemine ir biologinės savybės... Pirmasis iš jų sukėlė audinių uždegimą, siekė anodo, reagavo su Ca fosfatu, antrasis buvo baltyminio pobūdžio, netoksiškas ir turėjo imunizuojančių savybių.

1953 m. Smithas ir Co11 išskyrė juodligės egzotoksiną iš jūrų kiaulių, mirusių nuo šios ligos, kraujo plazmos, o paskui - iš kultūros skysčio, kai jūs augote. antrakis ant skystos maistinės terpės. Nustatyta, kad toksinas nėra susijęs, kaip manyta anksčiau, su kapsulės medžiaga, susidedančia iš poliglutamo rūgšties, tačiau jis yra glaudžiai susijęs su apsauginiu antigenu.

Smithas (1958) nustatė, kad toksino yra ne tik edematiniame skystyje, bet ir pakankamai didelėje koncentracijoje kraujo plazmoje, mažesniu kiekiu - pleuros ir pilvaplėvės eksudatuose. Toksinas sukėlė ne tik vietinę uždegiminę reakciją (edemą) su audinių sunaikinimo simptomais, bet ir jūrų kiaulių bei baltųjų pelių mirtį nuo antrinio šoko. Ši nuodinga medžiaga buvo įvardijama kaip mirtinas faktorius, o 1955 m.

Juodligės antiserumai, gauti iš arklių, hiperimunizuotų kapsulinėmis ir nekapsulinėmis bacilų padermėmis, slopino toksino poveikį. Tai parodė, kad toksino kilmė nebuvo susieta su kapsule. Toksinas taip pat buvo neutralizuotas triušių serumu, imunizuotu projekciniu antigenu.

Evansas (1954) in vitro išskyrė juodligės egzotoksiną. Smithas (1958) nustatė, kad virulentiškos ir be kapsulių vakcinos padermės sintetina vienodo stiprumo toksinus. Toksinas pasižymėjo didžiausia stiprumu I "/ 2 h nuo inkubacijos pradžios. Jo kiekis buvo tiesiogiai proporcingas bakterijų skaičiui kultūroje. Savo savybėmis kultūroje gautas toksinas nesiskyrė nuo sintetinto bacilomis in vitro; jis sukėlė antikūnų susidarymą gyvūnams ir neutralizuotas arklio juodligės serumu.

1958 m. Smithas nustatė, kad vietiniame juodligės toksine aiškiai skiriasi edematiniai ir mirtini veiksniai. Molner ir Strange (1960) toksiną suskirstė į du veiksnius. Vienas iš jų praėjo per stiklinį filtrą ir turėjo apsauginio antigeno savybių, antrasis liko ant filtro, tačiau buvo lengvai išplaunamas apdorojant 0,1 M karbonato buferiu, kurio pH 9,7. Abu veiksniai savaime nebuvo toksiški, tačiau jų mišinys parodė ryškų toksinį poveikį - jis sukėlė jūrų kiaulių odos uždegimines reakcijas ir pelių mirtį. Nustatyta, kad antrąjį faktorių sudaro du antigenai.

Stanley ir Smith (1961) parodė, kad be šių dviejų veiksnių (komponentų) yra dar vienas, serologiškai skirtingas nuo jų; jo buvo toksine, susidariusiame tiek kūne, tiek kultūroje. Šie veiksniai buvo žymimi I, II ir III skaičiais. Bea11, Taylor (1962) pasiūlė kitus pavadinimus: EF (edematogeninis arba uždegiminis faktorius); RA (imunogeninis-apsauginis antigenas) ir LF (mirtinas faktorius), kurie atitiko I, II ir III faktorius.

Vadinasi, I ir II komponentų mišinys pasižymi toksinėmis savybėmis (padidėja kapiliarų pralaidumas, dėl kurio atsiranda edema). Bet II komponentas pasižymi projekcinėmis savybėmis, sukeldamas nmmunogeninius procesus organizme. Į jį įdėjus I komponentą, žymiai padidėja jo imunogeniškumas, tačiau mišinyje su III komponentu apsauginės savybės sumažėja. III komponentas nėra toksiškas, tačiau pridėjus jį į II komponentą, mišinys tampa mirtinas. Visi trys toksino komponentai sudaro sinergetinį mišinį, turintį ir edematogeninį, ir mirtiną poveikį. Tai rodo, kad juodligės bacilos toksinas yra trijų komponentų sistema. Visą juodligės toksino kompleksą, susintetintą in vitro, neutralizuoja terapinis juodligės globulinas (Fedotova, Ulanova, 1970).

Visi trys juodligės tarpląstelinio toksino komponentai turi antigeninių savybių ir yra serologiškai aktyvūs. In vivo sintetinamas toksinas skiriasi nuo toksino, gaminamo in vitro, tuo, kad yra labiau mirtinas ir sunkiai aptinkamas.

Buvo nustatyta, kad juodligės sukėlėjas turi daug antigenų: polisacharidų kompleksas; kapsulinis polipeptidas; egzotoksinas, kuris apima tris komponentus - uždegiminį, imunogeninį (apsauginį antigeną) ir mirtiną. Kiekvienas iš mikrobų (toksinai, paviršiaus aktyviosios medžiagos, nukleorūgštys ir kt.) sąveikauja tik su griežtai apibrėžtais molekuliniais objektais užpultose ląstelėse. Jie veikia tik tas molekules, su kuriomis jie turi cheminį ryšį, papildytą struktūrų ir funkcijų atitikimu, tai yra cheminiu papildomumu. Jei nėra tinkamų taikinių, mikrobų ataka yra neveiksminga. Tai yra paveldimo imuniteto paslaptis. Pakeitus papildomų aminorūgščių išsidėstymo variantą (atskiras iš daugelio), sukuriamas imunitetas (Rumjancevas, 1984).

Juodligės bacilų virulentiškumą lemia du agresijos veiksniai: kapsulė, vaizduojanti d-glutamo rūgšties polipeptidą; egzotoksinas, susidedantis iš trijų atskirai netoksiškų baltymų komponentų; jų mišinys, kaip nurodyta aukščiau, sukelia patinimą ir mirtį.

Pirmasis iš Bacanthracis išskirtas antigenas buvo polisacharidų (somatinių) kompleksas. Jis turi serologinį ir cheminį ryšį su jūsų polisacharidais. cereus ir IV tipo pneumokokai. Pagal

Yu.V. Ezepchuk (1968), akivaizdaus polisacharidų specifiškumo nebuvimas suteikia pagrindo manyti, kad jie veikia jumyse. antracis yra tik struktūrinė funkcija, o ne (susijusi su patogeniškumo veiksniais.

Kitas antigenas yra kapsulinis polipeptidas, serologiškai trunnova; jo taip pat yra saprofitinėse sporas formuojančiose bacilose.

Kapsulinis polipeptidas yra laikomas vienu iš svarbių juodligės bacilos agresijos veiksnių, nes jis slopina apsauginę kūno fagocitinę reakciją, padidina tarpląstelinio juodligės toksino mirtino faktoriaus aktyvumą ir tuo pačiu slopina opsonizaciją. Tačiau somatinis polisacharidas ir kapsulinis glutamo rūgšties polipitidas, esantis bacilose, negali sukelti antikūnų sintezės, lemiančios gyvūno kūno specifinės humoralinės gynybos nuo juodligės sukėlėjo foną. Šį vaidmenį bacilose atlieka apsauginis antigenas (II komponentas) - baltyminio pobūdžio tarpląstelinė medžiaga, sintetinama mikrobo metabolinio aktyvumo metu gyvūno kūne ar specialiose maistinėse terpėse ir bakterijos ląstelės išskiriama į aplinką.

Kaip vienas iš patogeniškumo faktorių, imunogeninis juodligės mikrobo komponentas lemia anti-toksinio imuniteto susidarymą šiai infekcijai (Stanley ir Smith, 1963). Jis tarnauja kaip specifinių apsauginių savybių nešėjas.

Turimi duomenys rodo reikšmingą bacilos egzotoksino vaidmenį pasireiškiant daugeliui tipiškų infekcinio proceso ypatumų ir formuojantis specifinei organizmo gynybai. Tai suteikia pagrindo laikyti jį veiksniu, lemiančiu patogenezę ir imunitetą juodligėje.

1.4 Stabilumas

Bacilų ir jų sporų atsparumas ir išgyvenimo trukmė skiriasi. Pirmieji yra palyginti labilūs, antrieji - gana atsparūs. Bacilos neatidaryto lavono minkštuosiuose audiniuose gali išlikti 2–4 dienas. (Ipatenko, 1982), nes juos sunaikina proteolitiniai fermentai. Nepažeistų kaulų kaulų čiulpuose šis procesas vyksta kiek vėliau - bacilos čia išlieka gyvybingos iki 7 dienų (Franke, 1964; Ipatenko, 1964-1982).

Bacilos ilgai neatlaiko teigiamos temperatūros. Tiesioginiai saulės spinduliai juos nužudo per kelias valandas. Kaitinant iki 50–55 ° C, jie žūsta per valandą, 60 ° C temperatūroje - po 15 minučių, 75 ° C temperatūroje - po minutės, užvirus - iškart. Greitai džiūstant, bacilos žūva, o lėtai džiūstant atsiranda sporos. Bacilos gali žūti per 2 savaites 2–4 ° C temperatūroje. Gyvūnų skrandžio sultyse bacilos miršta per 30 minučių, sūdytoje mėsoje jos išlieka iki 15 dienų.

Žemesnėje temperatūroje išsaugomos bacilos. Taigi, esant -10 ° C temperatūrai, jie išgyvena 24 dienas, esant -24 ° C - 12 dp., Šaldytoje mėsoje -15 ° C temperatūroje - iki 15 dp. Jie gali būti laikomi net skysto azoto temperatūroje (-196 ° C).

Bacilos nėra atsparios įvairioms cheminėms medžiagoms. Alkoholis, eteris, 2% formalino tirpalas, 5% fenolio tirpalas, gyvsidabrio chlorido tirpalas 1: 1000,5-10% chloramino tirpalai, šviežias 5% baliklio tirpalas, vandenilio peroksidas juos sunaikina per 4–5 min. Bacilą patikimai užmuša metilbromidas. OKEBM (vienos svorio dalies etileno oksido ir 2,5 metilbromido suspensija).

Šviežias pienas taip pat pasižymi bakteriostatinėmis savybėmis (jis atitolina bacilų vystymąsi), tačiau šis poveikis trunka tik 24 valandas, vėliau bacilos pradeda daugintis, formuoja sporas, išlaikydamos jiems būdingą patogeniškumą. Antimikrobines pieno savybes lemia lizocimas ir laktinai - fermentinės oksidacijos produktai (Abdullin ir Kaparovich, 1971; Ipatenko, 1982). Bacilų augimą gali atidėti šviežias gyvūnų kraujas (Ipatenko, 1964-1982).

Bacilos yra jautrios kai kurių antibiotikų - penicilino streptomicino, oksitetraciklino, tetraciklino ir biomicino - veikimui. Bakteriostatinės savybės pasireiškia tiek in vitro, tiek in vivo. Mažiausios streptomicino koncentracijos, slopinančios bacilų augimą, yra nuo 1,15 iki 2,34 μg / ml; oksitetraciklinas - 0,22–1,87 μg / ml (Ipatenko, 1983).

Kai ant MPA auga bacilos, veikiamos mažų penicilino dozių, jos įgauna rutulius. Jų grandinės įgauna „perlų vėrinio“ išvaizdą. Ši reakcija yra specifinė ir gali būti naudojama pagreitintai diferencinei diagnostikai.

Streptomicino ir oksitetraciklino antimikrobinis poveikis virulentinėms ir vakcinos padermėms, imant atskirai ir kartu, nėra tas pats. Streptomicino ir oksitetraciklino mišinys turi ryškesnį poveikį nei kiekvienas iš jų atskirai. Ta pati bendra jų koncentracija mikrogramais 1 ml terpės yra 2 kartus didesnė nei oksitetraciklino ir 4 kartus didesnė už streptomicino poveikį (Novikov, 1960). Reikėtų nepamiršti, kad gamtoje yra antibiotikams atsparių bacilų individų.

Ginčo atkaklumas. Sporos yra daug stabilesnės nei vegetacinės bacilų formos ir ilgiau išsilaiko išorinėje aplinkoje. Didelis sporų atsparumas įvairioms įtakoms yra susijęs su tankio daugiasluoksnio apvalkalo buvimu, mažu vandens kiekiu jame ir fermentinio aktyvumo trūkumu. Vienas iš svarbiausių veiksnių, lemiančių didelį atsparumą sporoms, yra dipikolino rūgšties kalcio druskos buvimas; kalcio kiekis sporose yra daug didesnis nei vegetaciniuose kūnuose.

Sporų atsparumas daugiausia priklauso nuo to, kaip greitai jie susiformavo. Sporos, susidariusios 18-20 ° C temperatūroje, yra atsparesnės nei sporos, susidarančios esant 35-38 C temperatūrai (Revo, 1931). Sporos, esant tam tikroms sąlygoms, ištisoje aplinkoje (dirvožemyje) dešimtmečius gali išlikti gyvybingos ir virulingos (Ipatenko, 1982).

Džiovinimas neturi įtakos sporoms. Džiovintose agaro ir želatinos kultūrose sporos išlieka gyvybingos ir virulentiškos iki 55 metų. Tiesioginiai saulės spinduliai sunaikina sporas tik po 4 dienų (Franke, 1964; Ipatenko. 1982), tačiau ultravioletiniai spinduliai ir rentgeno spinduliai juos veikia destruktyviai - sporos žūva po - 20 valandų. Sausas karštis (120–140 ° C) naikina sporas tik po 2–3 valandų, esant 150 ° С temperatūrai, jie miršta po 1 valandos, tekantys garai, esant 100 ° С, juos sunaikina po 12–15 minučių, autoklavuojami 110 ° С temperatūroje - po 5–10 minučių, verdantys - valandą. Esant 400 C temperatūrai, sporos žūva per 20-30 s.

Sporos atsparios ir chemikalams. Etilo alkoholis, kurio koncentracija 25% ir daugiau, naikina sporas tik po 50 dienų, gyvsidabrio chloridas praskiedus 1000,5% fenolio tirpalu, 5–10% chloramino tirpalai juos sunaikina po kelių dienų (galbūt valandų), 1% - formalino tirpalas - po 2 valandos, 2% formalino tirpalas - po 10 - 15 minučių, 4% kalio permanganato tirpalas - po 15 minučių, 3% vandenilio peroksido tirpalas - po 1 valandos, 10% tirpalas kaustinė soda - po 2 valandų. Pasak M.A. Sefershaeva (1964), sporos yra atsparios dervos fenoliams, kurie yra naftos skalūnų pramonės atliekos.

Aktyvūs dezinfekantai, turintys baktericidinį sporicidinį ir fungicidinį poveikį, buvo trys vaistai iš interhalogeninių junginių grupės - jodo monochlorido druskos rūgšties tirpalas (vaistai Nr. 74 ir 74-B), piramas ir niranas ir vienas vaistas iš chloraktyvių junginių grupės - hipochloritas. (Boshyan, Dmitrieva, 1968).

Cheminių medžiagų patekimas į dirvą pastebimai nesumažina mikroorganizmų skaičiaus, tačiau neišvengiamai juos keičia rūšies sudėtis, sutrikdydama normalią mikrobiologinių procesų eigą dirvožemyje (Konobeeva, 1964). Tačiau cheminiai preparatai, veikiami dirvožemio mikrobų, patys gali virsti kitais junginiais, netgi nuodingesniais nei originalūs. Šiuo atžvilgiu reikia būti ypač atsargiems renkantis dirvožemio dezinfekavimo priemones ir metodus (Krasilnikov, 1965).

2. Evoliucija

Baco kilmės ir evoliucinių santykių klausimas. antracis su kitomis dirvožemį sporas formuojančiomis bacilomis, įskaitant jus. cereus lieka prieštaringas. Bandymai eksperimentinėmis sąlygomis transformuoti vienos rūšies mikrobus į kitus baigėsi nesėkme. Nėra Bac veislių. gamtoje antracis nerastas (Ginsburg, 1960),

Dauguma tyrinėtojų (Colony et al., 1970) juodligės, kaip ligos, atsiradimą sieja su kvartero periodu, tai yra su artiodaktilų paplitimo Žemėje laiku. Virulentinės sukėlėjo savybės tuo metu susiformavo esant bendro gyvūnų jautrumo sąlygoms, tarp jų nesant imuninės populiacijos.

Žolėdžiai (ypač atrajotojai), valgydami augalus, gali pakenkti maisto kanalo gleivinei. Šiose vietose dirvožemio mikrobai galėjo prasiskverbti į šeimininko organizmą (Abdullin, 1976). Dėl daugelio tokių kontaktų mikrobas gali turėti mutantą, galintį organizme susidaryti kapsulėms. Be to, organizme esantis kapsulinis mikrobas, pasirinkdamas patogeniškumą, matyt, vyko toksinių metabolitų išsiskyrimo link.

Evoliucijos metu gyvybingi mikrobų palikuonys sukėlė mutantus, kurie turėjo pagrindinę rūšies savybę - sukelti ligą ir imlių gyvūnų mirtį. Su vėlesnėmis infekcijomis ir šeimininkų pasikeitimais, genotipe buvo nustatytos naujos savybės (ir visų pirma virulentiškumas), kurios buvo būtinos tolesniam mikrobo dauginimuisi ir išsaugojimui.

Išvada

Juodligės pašalinimo problemos sprendimas daugiausia priklauso nuo patogeno ekologijos žinių, atsižvelgiant į įvairių aplinkos veiksnių įtaką jai, ligos plitimo modelius ir epizootinio pasireiškimo ypatybes. Reikėtų nepamiršti, kad juodligės paplitimo sritis siejama su dirvožemio geografinėmis zonomis. Todėl svarbų vaidmenį vaidina veiksmingi ligos sukėlėjo dirvožemio židinių nustatymo ir dezinfekavimo metodai.

Kova su juodlige turi būti pagrįsta gerai apgalvotu planu, kuriame nurodomas kiekvienas nepalankioje padėtyje esančių daiktų identifikavimas ir pašalinimas. Kiekvienais metais pateikiama naujų duomenų apie ligos epizootologiją, gyvybinę ligos sukėlėjo veiklą organizme ir išorinėje aplinkoje. Duomenys apie jo kintamumą kaupiami. Tobulinami gyvūnų diagnostikos, ligų prevencijos ir gydymo metodai, kuriami nauji dirvožemio dezinfekcijos metodai.

Bibliografija

1. Ipatenko N.G. Kultūrinių ir morfologinių savybių bei virulentiškų jūsų savybių tyrimas. antracis izoliuotas nuo dirvožemio, nuo sergančių ir negyvų gyvūnų. - M., 1979 m.

2. Ipatenko N.G. Laboratoriniai juodligės tyrimo metodai // Veterinarinė medicina, 1983, Nr. 7.

3. Katz L.N. Citologinis ir citocheminis jūsų kapsulės ir apvalkalo tyrimas. antracis // Mikrobiologija. - T. 33, Nr. 5, 1964 m.

4. Koganas I.Ya. Juodligės epizootologijos Vakarų Sibire ir prevencinių priemonių klausimu // Tr. Novosibirsko žemės ūkio institutas. - T. 45, 1971 m.

5. Koljakovas Ya.E., Melichovas A.D. Greita juodligės mikrobo vandenyje diagnostika // Veterinarinė medicina, 1960. Nr. 3.

6. Korotich L.S. Pogrebnyak L.I. Juodligė. - Kijevas: Derlius, 1976 m.

7. Kuzminas N.A. Dėl apvalkalo antigenų jūs klausiate. anthracis // Proceedings

8. MBA. - T. 61, 1972 m.

9. Levina EN, Arkhipova VR, juodligės bakteriofagų tyrimas // ZhMEI, 1967, Nr. 7.

10. Presnovas I.N. Jūsų nepastovumas. antracis natūraliomis sąlygomis // Veterinarija, 1966, Nr. 7.

11. Rumjancevas S. Mikrobai, evoliucija, imunitetas // Mokslas ir gyvenimas. - 1984, Nr. 8,

12. Juodligė. - M.: Kolosas, 1976 m.

13. Tretsetskaya T.A., Kulikovsky A.V. Struktūriniai pokyčiai virulentinio Vas kamieno sporose. antracis po sąlyčio su dezinfekavimo priemonėmis // ZhMEI, 1971, Nr.