Zich ozuqa muhitida urug'langan hujayralar sonini aniqlash (Koch plastinka usuli). R.Kochning ishlari va ularning mikrobiologiya va yuqumli patologiya uchun ahamiyati Aeroblarning sof kulturasini ajratib olish Mikrobiologiya.
Mikrobiologiya, virusologiya va immunologiya fanlari rivojlanishining asosiy bosqichlari
Bularga quyidagilar kiradi:
1.empirik bilim(mikroskoplar ixtiro qilinishidan oldin va ulardan mikrodunyoni o'rganishda foydalanish).
J. Fracastoro (1546) yuqumli kasalliklar qo'zg'atuvchilari - contagium vivumning tirik tabiatini taklif qildi.
2.Morfologik davr taxminan ikki yuz yil davom etdi.
Entoni van Levenguk 1675 yil birinchi marta protozoa, 1683 yilda - bakteriyalarning asosiy shakllari tasvirlangan. Asboblarning nomukammalligi (X300 mikroskoplarining maksimal kattalashtirishi) va mikrodunyoni o'rganish usullari mikroorganizmlar haqidagi ilmiy bilimlarning tez to'planishiga yordam bermadi.
3.Fiziologik davr(1875 yildan) - L. Paster va R. Kox davri.
L.Paster - fermentatsiya va parchalanish jarayonlarining mikrobiologik asoslarini o'rganish, sanoat mikrobiologiyasini rivojlantirish, mikroorganizmlarning tabiatdagi moddalar aylanishidagi rolini yoritish, kashfiyot anaerob mikroorganizmlar, tamoyillarni ishlab chiqish asepsiya, usullari sterilizatsiya, susaytirish ( susaytirish)virulentlik va qabul qilish vaktsinalar (vaktsina shtammlari).
R. Koch - tanlash usuli toza madaniyatlar qattiq ozuqa muhitida, bakteriyalarni anilin bo'yoqlari bilan bo'yash usullari, kuydirgi, vabo ( Koch vergul), sil kasalligi (Koch tayoqchalari), mikroskopiya texnikasini takomillashtirish. Henle-Koch postulatlari (triadasi) deb nomlanuvchi Henle mezonlarini eksperimental asoslash.
4.immunologik davr.
I.I.Mechnikov Emil Runing majoziy ta'rifiga ko'ra "mikrobiologiya shoiri". U mikrobiologiyada yangi davrni - immunitet (immunitet) haqidagi ta'limotni yaratdi, u fagotsitoz nazariyasini ishlab chiqdi va immunitetning hujayra nazariyasini asosladi.
Shu bilan birga, tanadagi ishlab chiqarish to'g'risida ma'lumotlar to'plangan antikorlar bakteriyalarga va ularga qarshi toksinlar bu P. Erlixga immunitetning gumoral nazariyasini ishlab chiqishga imkon berdi. Fagotsitar va gumoral nazariyalar tarafdorlari o'rtasidagi keyingi uzoq muddatli va samarali munozarada immunitetning ko'plab mexanizmlari ochildi va fan paydo bo'ldi. immunologiya.
Keyinchalik ma'lum bo'lishicha, irsiy va orttirilgan immunitet beshta asosiy tizimning muvofiqlashtirilgan faoliyatiga bog'liq: makrofaglar, komplement, T- va B-limfotsitlar, interferonlar, immunitetning turli shakllarini ta'minlovchi asosiy gistofotsitlar tizimi. I.I.Mechnikov va P.Erlix 1908 yil. Nobel mukofoti bilan taqdirlandi.
1892 yil 12 fevral Rossiya Fanlar akademiyasining yig'ilishida D.I.Ivanovskiy tamaki mozaikasi kasalligining qo'zg'atuvchisi filtrlanadigan virus ekanligini ma'lum qildi. Bu sana tug'ilgan kun deb hisoblanishi mumkin virusologiya, va D.I.Ivanovskiy - uning asoschisi. Keyinchalik ma'lum bo'ldiki, viruslar nafaqat o'simliklarda, balki odamlarda, hayvonlarda va hatto bakteriyalarda ham kasalliklarga olib keladi. Biroq, genning tabiati va genetik kodni o'rnatgandan keyingina, viruslar yovvoyi tabiat sifatida tasniflandi.
5. Mikrobiologiyaning rivojlanishidagi navbatdagi muhim qadam bo'ldi antibiotiklarning kashfiyoti. 1929 yilda A.Fleming penitsillinni kashf etdi va antibiotik terapiyasi davri boshlandi, bu esa tibbiyotning inqilobiy taraqqiyotiga olib keldi. Keyinchalik ma'lum bo'ldiki, mikroblar antibiotiklarga moslashadi va dorilarga chidamlilik mexanizmlarini o'rganish ikkinchi kashfiyotga olib keldi. ekstraxromosoma (plazmid) genom bakteriyalar.
O'qish plazmid ular viruslardan ham oddiy organizmlar ekanligini ko'rsatdi va farqli o'laroq bakteriofaglar bakteriyalarga zarar bermang, balki ularga qo'shimcha biologik xususiyatlarni bering. Plazmidlarning kashf etilishi hayotning mavjud shakllari va uning rivojlanishining mumkin bo'lgan yo'llari haqidagi g'oyalarni sezilarli darajada to'ldirdi.
6. Zamonaviy molekulyar genetik bosqich mikrobiologiya, virusologiya va immunologiyaning rivojlanishi 20-asrning ikkinchi yarmida genetika va molekulyar biologiya yutuqlari, elektron mikroskopning yaratilishi munosabati bilan boshlandi.
Bakteriyalar ustida o'tkazilgan tajribalarda DNKning irsiy belgilarning uzatilishidagi roli isbotlangan. Molekulyar biologik va genetik tadqiqotlar ob'ekti sifatida bakteriyalar, viruslar va keyinchalik plazmidlardan foydalanish hayotning asosiy jarayonlarini chuqurroq tushunishga olib keldi. Bakteriyalar DNKsida genetik ma'lumotni kodlash tamoyillarini o'rganish va genetik kodning universalligini o'rnatish yanada yuqori darajada tashkil etilgan organizmlarga xos bo'lgan molekulyar genetik naqshlarni yaxshiroq tushunishga imkon berdi.
Escherichia coli genomining dekodlanishi genlarni qurish va transplantatsiya qilish imkonini berdi. Hozirgacha Genetika muhandisligi yangi yo‘nalishlarni yaratdi biotexnologiya.
Ko'pgina viruslarning molekulyar genetik tashkiloti va ularning hujayralar bilan o'zaro ta'sir qilish mexanizmlari ochildi, virus DNKsining sezgir hujayra genomiga integratsiyalashuv qobiliyati va virusli karsinogenezning asosiy mexanizmlari o'rnatildi.
Immunologiya haqiqiy inqilobni boshdan kechirdi, infektsion immunologiyadan ancha uzoqlashdi va eng muhim fundamental tibbiy va biologik fanlardan biriga aylandi. Bugungi kunga kelib, immunologiya nafaqat infektsiyalardan himoya qilishni o'rganadigan fandir. Zamonaviy ma'noda Immunologiya - bu organizmning tarkibiy va funktsional yaxlitligini saqlab, genetik jihatdan begona narsalardan o'zini o'zi himoya qilish mexanizmlarini o'rganadigan fan.
Hozirgi vaqtda immunologiya bir qator ixtisoslashgan yo'nalishlarni o'z ichiga oladi, ular orasida yuqumli immunologiya bilan bir qatorda immunogenetika, immunomorfologiya, transplantatsiya immunologiyasi, immunopatologiya, immunohematologiya, onkoimmunologiya, ontogenez immunologiyasi, vaktsinologiya va amaliy immunodiagnostika kiradi.
Mikrobiologiya va virusologiya kabi fundamental biologiya fanlari shuningdek, o'z maqsad va vazifalariga ega bo'lgan bir qator mustaqil ilmiy fanlarni o'z ichiga oladi: umumiy, texnik (sanoat), qishloq xo'jaligi, veterinariya va insoniyat uchun eng muhim. tibbiy mikrobiologiya va virusologiya.
Tibbiy mikrobiologiya va virusologiya odamning yuqumli kasalliklari qoʻzgʻatuvchilarini (ularning morfologiyasi, fiziologiyasi, ekologiyasi, biologik va genetik xususiyatlarini oʻrganadi), ularni etishtirish va aniqlash usullarini, diagnostika, davolash va oldini olishning oʻziga xos usullarini ishlab chiqadi.
Bakteriyalarning umumiy sonini aniqlash uchun Koch usuli qo'llaniladi. Bo'sh steril Petri idishida tegishli suyultirilgandan 1 ml tekshiriluvchi material quyiladi va 10 - 15 ml erigan va 45 0 S MPA ga sovutilgan quyiladi, stakanni stol yuzasida aylantirib, suyuqlik bilan aralashtiriladi.
Ekinlarni kultivatsiya qilgandan so'ng, agarning yuzasida va chuqurligida o'sgan koloniyalar hisoblanadi. Buning uchun stakan qora fonga teskari qo'yiladi, har bir sanalgan koloniya stakanga marker bilan belgilanadi. Faqat 30 dan 300 ta koloniyagacha o'sgan idishlarni baholang. Agar idishda 300 dan ortiq koloniyalar o'sgan bo'lsa va tahlilni takrorlash mumkin bo'lmasa, u holda koloniyalarni kattalashtiruvchi oyna va panjarali maxsus plastinka yordamida kuchli yon yorug'lik ostida hisoblash mumkin.
Koloniyalar soni idishning turli joylarida 1 sm 2 bo'lgan kamida 20 kvadratda hisoblanadi. 1 sm 2 dagi koloniyalarning o'rtacha soni hisoblanadi, bu idishning maydoniga ko'paytiriladi.
Koloniyalarni sanashda maxsus bakteriya hisoblagichi PSB dan foydalanish mumkin.
Har bir idishdagi koloniyalarni hisoblash natijasi suyultirishni hisobga olgan holda 1 ml (sm 3) yoki 1 g sinov materialidagi bakteriyalar soni hisoblanadi. Bakteriyalarning yakuniy soni uchun ikkita qo'shni suyultirishni emlash bilan plitalardagi koloniyalarni hisoblash natijalarining o'rtacha arifmetik qiymati olinadi.
Misol: naslchilik 10 -1 - 250 koloniya, naslchilik 10 -2 - 23 koloniya.
Bakteriyalarning umumiy soni = 250 x 10 + 23 x 100 / 2 = 2400 cfu / ml = 2,4 x 10 2 cfu / ml (1 ml uchun koloniya hosil qiluvchi birliklar).
Tadqiqot natijasini 2-3 muhim raqamga yaxlitlash mumkin.
Titrlash usuli.
PSD sonini aniqlash uchun foydalaniladi.
1-bosqich: materialning homogenlashuvi. Agar kerak bo'lsa, mikroorganizmlarni suyuq fazaga o'tkazish uchun suspenziya tayyorlash.
2-bosqich: bir qator suyultirishlarni tayyorlash.
3-bosqich: sinov materialining tanlangan hajmlarini (100, 10, 1 ml) va uning 1 ml suyultirilishini suyuq ozuqa muhitiga ekish. Usulning aniqligini oshirish uchun har bir hajmni oziqlantiruvchi muhitning bir nechta qismlariga (ikki, uch, besh qatorli ekish) parallel ravishda ekish mumkin. Optimal - uch marta takrorlash (nisbatan arzon narxda etarlicha ishonchlilik).
4-bosqich: suyuq ozuqa muhitida o'sish mavjudligini va qattiq ozuqa muhitida musbat hajmlardan ekishni hisobga olgan holda.
5-bosqich: qattiq ozuqa muhitida o'stirilgan mikroorganizmlarni aniqlash. Shu bilan birga, madaniy xususiyatlar hisobga olinadi va agar kerak bo'lsa, qo'shimcha tadqiqotlar o'tkaziladi (tinktorial, morfologik, biokimyoviy va serologik xususiyatlarni o'rganish).
Agar bitta qatorli usul qo'llanilsa, natija odatda maqsadli mikroorganizmning titri sifatida ifodalanadi, u hali ham topilgan eng kichik hajm (eng yuqori suyultirish) sifatida qabul qilinadi.
Agar ko'p qatorli usul ishlatilgan bo'lsa, natijalar titrni, indeksni (MP) aniqlashga imkon beradigan ijobiy hajmlarning kombinatsiyasiga asoslanib, maxsus jadvallar yordamida qayd etiladi.
Maxsus muhitlar.
Bakteriologiyada sanoat ishlab chiqarishining quruq ozuqa muhitlari keng qo'llaniladi, ular suvdan tashqari muhitning barcha komponentlarini o'z ichiga olgan gigroskopik kukunlardir. Ularni tayyorlash uchun arzon nooziq-ovqat mahsulotlarining (baliq chiqindilari, go'sht va suyak uni, texnik kazein) triptik hazm qilishlari qo'llaniladi. Ular tashish uchun qulay, uzoq vaqt davomida saqlanishi mumkin, laboratoriyalarni ommaviy axborot vositalarini tayyorlashning ulkan jarayonidan qutqaradi va ommaviy axborot vositalarini standartlashtirish masalasini hal qilishga yaqinlashtiradi. Tibbiyot sanoati quruq muhitda Endo, Levin, Ploskirev, vismut sulfit agar, ozuqaviy agar, BP indikatorli uglevodlar va boshqalarni ishlab chiqaradi.
termostatlar
Termostatlar mikroorganizmlarni etishtirish uchun ishlatiladi.
Termostat - bu doimiy haroratni ushlab turadigan qurilma. Qurilma havo yoki suv aylanadigan isitgich, kamera, er-xotin devorlardan iborat. Harorat termostat tomonidan boshqariladi. Ko'pgina mikroorganizmlarning ko'payishi uchun optimal harorat 37 ° S dir.
7-FAOLIYAT
MAVZU: SOF AEROBIK MADANIYATNI IZOLASYON USULLARI. AEROB BAKTERİYALARNING SOZ MADANIYATINI MEXANIK AYRISH USULLARI BILAN BOSHQACHILAR.
Dars rejasi
1. Bakteriyalarning “sof madaniyati” tushunchasi
2. Mexanik ajratish yo'li bilan sof kulturalarni ajratib olish usullari
3. Sof kulturalarni ajratib olishning biologik usullari
4. Bakteriyalarni aniqlash usullari
Darsning maqsadi: Talabalarni sof kulturalarni ajratib olishning turli usullari bilan tanishtirish, ilmoq, zarbalar, nayzalar yordamida ekin ekishni o'rgatish.
Namoyish uchun ko'rsatmalar
Tabiiy yashash joylarida bakteriyalar assotsiatsiyalarda uchraydi. Mikroblarning xossalarini, patologik jarayonning rivojlanishidagi rolini aniqlash uchun bir jinsli populyatsiyalar (sof kulturalar) ko'rinishidagi bakteriyalar bo'lishi kerak. Sof kultura - ozuqa muhitida o'stirilgan bir xil turdagi bakterial shaxslarning to'plami.
Aerob bakteriyalarning sof kulturalarini ajratib olish usullari
Paster usuli Koch usuli biologik jismoniy
(tarixiy (plastinka simlari) mavjud)
Ma'nosi)
Kimyoviy usul
Shchukevich
Zamonaviy
Ilgak bilan ekish Spatula bilan ekish
(Drigalski usuli)
Sof madaniyatlarni ajratish usullari:
1. Mexanik ajratish usullari tekshirilayotgan materialni agar yuzasiga ketma-ket surtish orqali mikroblarni ajratishga asoslangan.
a) Paster usuli - tarixiy ahamiyatga ega bo'lib, sinov materialini suyuq ozuqa muhitida siljitish usuli bilan ketma-ket suyultirishni nazarda tutadi.
b) Koch usuli - plastinkalarni joylashtirish usuli - tekshiriladigan materialni go'sht-peptonli agar bilan ketma-ket suyultirish, so'ngra suyultirilgan moddasi bo'lgan probirkalarni Petri idishlariga quyishga asoslangan.
v) Drygalski usuli - mikroflora bilan mo'l-ko'l urug'langan materialni ekish paytida, spatula bilan ketma-ket ekish uchun 2-3 stakan foydalaning.
d) Parallel zarbalarda halqa bilan ekish.
2. Biologik usullar patogenlarning biologik xususiyatlariga asoslanadi.
a) Biologik - o'ta sezgir hayvonlarning infektsiyasi, bu erda mikroblar tez ko'payadi va to'planadi. Ba'zi hollarda, bu usul kasal odamdan patogen madaniyatini ajratishga imkon beradigan yagona usul (masalan, tulyaremiya bilan), boshqa hollarda u sezgirroqdir (masalan, oq sichqonlarda pnevmokokk izolyatsiyasi). yoki gvineya cho'chqalarida sil kasalligining qo'zg'atuvchisi).
b) Kimyoviy - mikobakteriyalarning kislotaga chidamliligiga asoslangan. Materialni hamrohlik qiluvchi floradan ozod qilish uchun, u
kislota eritmasi bilan ishlov beriladi. Faqat tuberkulyar tayoqchalar o'sadi, chunki kislotaga chidamli mikroblar kislota ta'sirida nobud bo'ladi.
v) Fizik usul sporalarning issiqlikka chidamliligiga asoslangan. dan spora hosil qiluvchi bakteriyalar madaniyatini ajratib olish
aralashmalar, material 80 ° C da isitiladi va ozuqaviy muhitda emlanadi. Faqat sporali bakteriyalar o'sadi, chunki ularning sporalari tirik qoldi va o'sishni ta'minladi.
d) Shukevich usuli - sudraluvchi o'sishga qodir vulgar proteusning yuqori harakatchanligiga asoslangan.
Agar plastinkasini tayyorlash usuli
MPA suv hammomida eritiladi, keyin 50-55 ° S gacha sovutiladi. Flakonning bo‘yni spirt lampasi alangasida yondiriladi, Petri idishlari ochiladi, shunda flakonlarning bo‘yni ichkariga kiradi, idish chetlariga tegmasdan, 10-15 ml MPA quyiladi, qopqog‘i yopiladi. vosita teng taqsimlanishi uchun idishni silkiting, uni gorizontal yuzaga qotib qolguncha qoldiring. Quritgandan so'ng, plastinka agari bo'lgan plitalar sovuqda saqlanadi.
Loop ekish
Steril sovutilgan halqa bilan bir tomchi material olinadi, chashkaning bir cheti chap qo'l bilan biroz ochiladi, ichiga ilmoq kiritiladi va qarama-qarshi chetida bir joyda bir nechta zarbalar qilinadi, so'ngra halqa yirtilib ketadi. va material 5-6 mm oraliqda kubokning bir chetidan ikkinchisiga parallel zarbalar bilan emlanadi. Ekish boshida mikroblar ko'p bo'lganda, ular birlashuvchi o'sishni beradi, lekin mikroblarning har bir zarbasi bilan mikroblar kamroq va kamroq bo'ladi va ular yolg'iz qoladi va beradi. izolyatsiya qilingan koloniyalar.
Drygalski usuli bo'yicha ekish
Bu usul mikroflora (yiring, najas, balg'am) bilan mo'l-ko'l urug'langan materialni ekishda qo'llaniladi. Drygalskiy usuli bo'yicha ekish uchun spatula va bir nechta stakan (3-4) olinadi. Spatula - uchburchak yoki L shaklidagi egilgan metall sim yoki shisha dartdan yasalgan asbob. Material birinchi stakanga halqa yoki pipetka bilan kiritiladi va spatula bilan muhit yuzasiga bir tekis taqsimlanadi, xuddi shu spatula bilan uni kuydirmasdan, material ikkinchi stakandagi ozuqa muhitiga surtiladi, so'ngra uchinchisida. Ushbu emlash bilan birinchi plastinka qo'shilgan o'sishga ega bo'ladi va keyingi plitalarda izolyatsiya qilingan koloniyalar o'sadi.
Bakteriyalarni sof madaniyat sifatida ajratib olishning nisbatan kam usullari ma'lum. Bu ko'pincha qattiq o'sish muhitida bitta hujayralarni chiziqli emlash usuli yordamida izolyatsiya qilish yoki plastinkalarga oz miqdordagi suyuqlik kulturasini quyish orqali amalga oshiriladi ( suyultirish usuli). Biroq, alohida koloniya olish har doim ham madaniyatning tozaligini kafolatlamaydi, chunki koloniyalar nafaqat alohida hujayralardan, balki ularning klasterlaridan ham o'sishi mumkin. Agar mikroorganizmlar shilimshiq hosil qilsa, unda begona shakllar ko'pincha unga biriktiriladi. Tozalash uchun selektiv bo'lmagan muhitdan (MPA) foydalanish afzalroqdir, chunki ifloslantiruvchi moddalar unda yaxshiroq o'sadi va aniqlash osonroq.
Qattiq ozuqa muhitida ajratilgan koloniyalarni olish yoki mikroorganizmlarning suspenziyasini spatula bilan elakdan o'tkazish orqali erishiladi ( Koch usuli) yoki bakteriologik halqa yordamida ( zaiflashtiruvchi insult usuli). Mikrob hujayralarining mexanik ajralishi natijasida ularning har biri bitta mikrob turlarining izolyatsiya qilingan koloniyasini keltirib chiqarishi mumkin.
Spatula bilan elakdan o'tkazish (Koch usuli) quyidagi ketma-ketlikda ishlab chiqariladi:
1) bir tomchi boyitish kulturasi steril pipetka bilan No1 stakandagi ozuqa muhitining yuzasiga surtiladi va steril spatula bilan taqsimlanadi;
2) spatula chiqariladi, chashka tez yopiladi va spatulani sterilizatsiya qilmasdan No2 stakanga o'tkaziladi. Namunani tarqatish uchun avval ishlatilgan spatulaning bir xil tomoni bilan uning yuzasiga tegib, muhitning butun yuzasi bo'ylab madaniyatning tarqalishini simulyatsiya qiling;
3) 3-sonli stakanda aynan bir xil harakatlar amalga oshiriladi, shundan so'ng spatula sterilizatsiya qilinadi;
4) urug'langan stakanlar termostatga joylashtiriladi va optimal haroratda inkubatsiya qilinadi.
Muayyan vaqtdan keyin stakanlar termostatdan chiqariladi va mikroorganizmlarning rivojlanishi o'rganiladi. Odatda, 1-sonli idishda bakteriyalarning doimiy o'sishi kuzatiladi, keyingi idishlarda koloniyalar qayd etiladi.
Loop elakdan o'tkazish (to'xtatuvchi zarba usuli) Petri idishlaridagi agar muhiti yuzasiga boyitish madaniyatidan bakteriologik halqani ekishni o'z ichiga oladi. Birinchi bosqichda agar muhitda bir qator parallel zarbalar bilan kultura bilan halqa qo'llaniladi (4.2-rasm, A). Ilgak sterilizatsiya qilinadi, agar muhitning emlanmagan qismida sovutiladi va birinchisiga perpendikulyar yo'nalishda bir qator zarbalar chiziladi (4.2-rasm, B). Keyin pastadir yana sterilizatsiya qilinadi, sovutiladi va yo'nalishda zarbalar qo'llaniladi IN(4.2-rasm), va keyingi sterilizatsiyadan keyin - yo'nalishda G(4.2-rasm). Kuboklar termostatga joylashtiriladi va ma'lum vaqtdan keyin natijalar hisobga olinadi. Odatda insultlarda A Va B koloniyalar katta soni o'sadi (ba'zan doimiy o'sish), qon tomirlarida esa IN Va G ajratilgan koloniyalar hosil bo'ladi.
4.2-rasm - Izolyatsiya qilingan koloniyalarni olish uchun bakteriyalarni zarbalar bilan elakdan o'tkazish sxemasi
Qattiq muhitda ketma-ket suyultirish- plastinkali emlashning eng oddiy usuli, u namunani steril eritilgan va sovutilgan agar bilan probirkaga sepgandan so'ng, muhit aralashtiriladi, Petri idishiga quyiladi va qotib qoladi. Yaxshi izolyatsiya qilingan koloniyalarni olish uchun ketma-ket o'n martalik suyultirishlar tayyorlanadi va idishga 1 ml namunalar darhol qo'shiladi, 15-20 ml erigan agar muhiti qo'shiladi va idishni silkitib aralashtiriladi. Ba'zida alohida koloniyalar agarga botiriladi va ularni faqat mexanik ravishda olib tashlash mumkin. Bakteriyalarning bir muddat erigan agar haroratida muhitda bo'lishi ham yomon.
Agar o'simliklardagi ma'lum belgilar va mikroskopik tekshirish natijalariga ko'ra, kasallikning qo'zg'atuvchisi bakteriya ekanligiga shubha qilingan bo'lsa, keyingi bosqichda uni izolyatsiya qilish kerak.
Bunday holda, patogenning bog'langan organizmlar bilan ifloslanganligi, ya'ni aralash populyatsiya mavjudligi taxmin qilinadi. Qo'zg'atuvchini alohida o'sayotgan koloniya sifatida olish uchun to'qima maceratini muhitga chiziq bilan surtish kerak.
Daraxt ekish. Kalsinlangan inokulyatsiya halqasi bilan oz miqdorda bakteriyalarni o'z ichiga olgan o'simlik to'qimalarining macerati olinadi va agar yuzasiga zarar bermasdan, engil harakatlar bilan tayyorlangan ozuqa muhitiga 4-6 marta qo'llaniladi. Ilgakni qayta yoqqandan so'ng, vosita bilan stakan 90 ° o'ngga buriladi va keyin ikkinchi zarbadan yana 4-6 marta qo'llaniladi, igna qayta yoqiladi va uchinchi emlash amalga oshiriladi. Bu boshlang'ich materialning shunday suyultirilishiga erishadi, bunda bakteriyalar termostatda 48-72 soat davomida 28 ° C da inkubatsiya qilingandan so'ng, turli shakl va rangdagi alohida koloniyalarni hosil qiladi. Keyinchalik koloniyalar keyingi o'rganish uchun qiya agar naychalariga o'tkaziladi. Koloniya kalsinlangan halqa bilan olinadi va ilon yoki zigzag shaklida ehtiyotkorlik bilan harakat qilib, ozuqaviy agarga qo'llaniladi.
Koch quyish usuli. Kochni quyish usuli har bir koloniyaning bitta bakteriya hujayrasidan hosil bo'lishini ta'minlaydi. Boshlang'ich materialni steril suvda to'xtatib turish va Koch usulini faqat ushbu suyultirish bilan qo'llash yaxshidir. Suspenziyaning oz miqdori 60 °C gacha sovutilgan ozuqaviy muhit bilan birinchi probirkaga o'tkaziladi. Keyin kolba tarkibini kaftlar orasiga aylantirib, inokulum bilan aralashtiriladi. Keyin ikkinchi probirkani olib, uni gorelka olovi ustida ehtiyotkorlik bilan oching va unga katta halqalar bilan birinchi probirkadan substratning uchta qismini o'tkazing. Probirkaning bo'yni va tiqinni otgandan so'ng uning tarkibi birinchi Petri kosasiga quyiladi, idishning qopqog'ini biroz ochib, probirkaning bo'ynini uning ostiga qo'yish kifoya. To'kilgandan so'ng darhol chashka yopiladi va oziqlantiruvchi vosita ehtiyotkorlik bilan harakatlar bilan teng taqsimlanadi.
Ikkinchi probirkaning tarkibini yaxshilab aralashtirgandan so'ng, uchinchi probirkani oling va unga ikkinchisidan halqa bilan substratning oltita qismini o'tkazing. Probirka ichidagilar idishga quyiladi va probirka ichidagilar aralashtirgandan so'ng stakanga quyiladi. Muhit bilan stakanlar termostatda 28 ° C da inkubatsiya qilinadi, bir necha kundan keyin boshlang'ich material tarkibidagi bakteriyalar koloniyalarni hosil qiladi.
Seriyali naslchilik. Agar, masalan, bakteriyalarni tuproqdan ajratish kerak bo'lsa, unda ketma-ket suyultirish qo'llaniladi. Steril oziq muhiti (har bir idishga 15 ml) idishlarga quyiladi, suspenziyaning oxirgi uchta suyultirilishidan 0,1 ml qotib qolgan agarga surtiladi va shisha spatula bilan yuzaga surtiladi.
Bakteriyalarni ajratib olish uchun 1 g tuproq 9 ml suvga suspenziya qilinadi, yaxshilab chayqatiladi, bir necha soniya turiladi va suspenziyadan ketma-ket suyultirishlar tayyorlanadi. Ushbu usul yordamida har bir namunadagi mikroorganizmlar sonini aniqlash mumkin.
Agar xato topsangiz, matnning bir qismini ajratib ko'rsating va bosing Ctrl+Enter.
